[发明专利]一种用于检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒

权利要求书

1.一种检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒，其特征在于，包括：由用于点样的标准载玻片、用于防止漏液的软质硅胶垫、划分为若干个小格的硬质框架、U形框夹形成的反应槽，所述U形框夹从两侧将由上至下放置的尺寸对应的所述硬质框架、所述软质硅胶垫和所述标准载玻片夹紧在一起，以致所述标准载玻片贴紧封闭所述硬质框架的底部，使所述硬质框架上的每个小格形成一个小的反应槽，各个小的反应槽里的标准载玻片结合有相应浓度的特异性抗体；

所述硬质框架划分为2×8或4×16个小格，形成16或64孔框架；

所述特异性抗体为如下8种肿瘤标志物的抗体组合：AFP、AFP-L3、DCP、AFU、GP73、SCCA、CK19、VEGF；

所述特异性抗体是采用以下步骤固定于载玻片：

1)特异性抗体与含有1.4至2％酪蛋白的pH7.4磷酸盐缓冲液混合形成抗体混合物；

2)于抗体混合物中将每个抗体含量以0.01至2ng固定于点样孔，每个抗体设置2至4个重复孔；

3)抗体芯片点阵排布于载玻片，载玻片每平方厘米点10至100个特异性抗体；

所述载玻片包括阳性对照孔和阴性对照孔；阳性对照孔为对应特异性抗体的具有相应浓度的生物素化IgG抗体，每个反应的生物素化的IgG抗体的浓度一致，以便于标准化检测；阴性对照孔为具有相应浓度的生物素化的无关抗体，每个反应的生物素化的无关抗体的浓度一致，以便于标准化检测。

2.根据权利要求1所述的检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括样本处理液，所述样本处理液为包含蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液，用于裂解细胞沉淀物，可处理血浆、血清、尿液、咽拭子、细胞培养物或组织样本。

3.根据权利要求1所述的检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒，其特征在于，利用荧光素作为检测信号，通过比较未知样品和标准样本的信号来确定样品中的目标抗原的浓度。

4.根据权利要求1所述的检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒，其特征在于，利用GenepixPro6.1软件获取芯片上所有点的信号强度，利用电子表格版的分析软件计算每个蛋白的表达水平和标准曲线，利用阳性对照信号标准化，背景阈值设置对照组的平均强度加上2倍标准偏差(SD)进行统计，表达水平高于背景加上2×SD的蛋白用于校正的T检验分析。

5.根据权利要求1所述的检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒，其特征在于，采用全自动点样仪器，各特异性抗体蛋白质的排布可以按照实验设计需要进行调整，根据不同的蛋白质芯片排布阵列，控制全自动点样仪，制备出所需要的中间产品。