[发明专利]一种用于检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒。该抗体芯片试剂盒包括：由玻片、软质硅胶垫、硬质框架、U形框夹形成反应槽，硬质框架划分为2×8或4×16个小格，形成16或64孔框架；其中，软质硅胶垫尺寸对应于所述硬质框架以及标准玻片；硬质框架的每个小格形成一个小的反应槽，各个小的反应槽里的标准玻片结合有相应浓度的特异性抗体；所述特异性抗体为针对选自如下8种肿瘤标志物的抗体：AFP、AFP‑L3、DCP、AFU、GP73、SCCA、CK19、VEGF。该试剂盒采用抗体芯片技术，能够同时检测8种肝癌标志物，避免传统单个指标检测方法样本使用量大、检测时间长的弊端，具有检测速度快、样本用量少、灵敏度高、稳定性好等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测肝癌标志物的抗体芯片试剂盒。

背景技术

肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率逐年增长，已超过62.6万/年，居于恶性肿瘤的第5位；死亡接近60万/年，位居肿瘤相关死亡的第3位。PLC在我国高发，目前，我国发病人数约占全球的55％；在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌，位居第二。因此，肝癌严重威胁我国人民健康和生命。肝脏是人体最大的实质性器官，承担人体的各类重要代谢功能，因此，肝脏一旦出现恶性肿瘤将导致未及生命的严重后果。又由于肝脏具有丰富的血流供应，与人体的重要结构如下腔静脉、门静脉、胆道系统等关系密切；肝脏恶性肿瘤发病隐匿，侵袭性生长快速，其治疗甚为困难。因此，早期发现、早期诊断对肝癌的治疗及其重要。大量的研究已经证实，在肝癌患者的早期，血清中有数种分子水平已经发生了明显的变化，比如：AFP、AFP-L3、CK19、SCCA、DCP、GP73等明显上升。因此，通过对血清中这些分子水平的定量检查可以作为肝癌预测的一个有效手段。

AFP是目前诊断原发性肝癌最重要的肿瘤标记物,已被广泛用于肝癌的普查、诊断、判断治疗效果和预测复发中,但AFP的敏感性和特异性较差,据文献报道，阳性率仅为60-70％，并存在假阳性。

AFP-L3为AFP的异质体。有研究认为，AFP-L3比AFP具有更高的特异性，其敏感性和特异性分别为36至96％和89至94％。研究表明，AFP-L3与肝功能不佳，肿瘤低分化程度及生物学恶性行为相关。

细胞角蛋白19(CK19)表达于胆管上皮，肝脏干细胞，是胆管上皮标志物。CK19在恶性上皮细胞中，激活的蛋白酶加速了细胞角蛋白的降解，使得大量细胞角蛋白片段释放入血，可作为肿瘤鉴别诊断的参考指标，并能提未肿瘤的分化程度。

鳞状细胞癌抗原(SCCA)鳞状细胞癌抗原(SCCA)是从宫颈鳞状上皮细胞癌组织提取的肿瘤相关抗原TA-4，正常人血清含量极微＜2.5μg/L。SCCA是鳞癌的肿瘤标志物，适用于宫颈癌、肺鳞癌、食管癌、头颈部癌，膀胱癌的辅助诊断，治疗观察和复发监测。

异常凝血酶原(DCP)是产生于肿瘤细胞的不正常的凝血酶原，与正常凝血酶原相比,DCP的分子结构特点是其Gla domain结构域中的一个或多个Glu残基(Glu residus)没有被完全羧化(γ-carboxylated)成为Gla,从而失去凝血功能。大约50至60％的HCC患者DCP水平升高。由于肝病本身可以引起AFP水平的增高，但不能导致DCP水平的增高，所以DCP诊断HCC比AFP更特异。

高尔基蛋白73(GP73)是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白。研究表明，在正常的人体肝组织中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞表达很少甚至不表达。肝细胞受到病毒感染后可引起GP73的表达上调，在肝癌患者血清中GP73水平显著升高。GP73诊断肝癌的敏感性为69％，特异性为75％。

血管内皮生长因子(VEGF)，可在体内诱导血管新生(induce angiogenesis invivo)。VEGF对单核细胞和造骨细胞也是化学趋化因子。在体内，VEGF能诱导血管生成和增加血管渗透性。基于这些体外与体内的活性，VEGF被认为在伤口愈合、胚胎发育、固体瘤的生长与转移等过程有重要作用。