[发明专利]一种固定化蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种用于固定蛋白的方法。本发明还涉及一种用于固定蛋白的化合物。所述化合物具有氟磺酰基，能够特异性地且共价地在酪氨酸残基处来标记蛋白。

技术领域

本发明涉及一种用于固定蛋白的化合物以及一种用于固定蛋白的方法。

背景技术

将蛋白固定到如微阵列、芯片和珠等固体载体上是一种用于阐明蛋白-蛋白或蛋白-配体相互作用以及用于以高处理量的方式探测新蛋白功能的强大方法。不同于DNA微阵列的情况，由于在实现将蛋白选择性地且均匀取向地分布到固体表面中的固有困难，实施用于蛋白固定的通用方法存在着挑战。

常规固定方法主要依赖三种机理：物理连接、共价键合和生物亲和性固定。然而非选择性的物理连接或共价键合可能阻塞活性部位或甚至使蛋白变性。通过重组融合标签和所偶联蛋白的共表达进行固定可以相应保证蛋白的确切取向并且提供了微调生物结合物拓扑结构的灵活性。例如，将sjGST标签固定到GSH-结合的聚合物珠或将His-标签固定到Ni-NTA芯片或将生物素-标签结合到链霉亲和素涂布的固体载体上已经被广泛地选作非共价蛋白固定方法用于保持所标签蛋白的活性。

因此开发一种有效且稳定的固定蛋白的策略，能够最大限度地保持活性，是有着显著意义和应用价值。位置选择性共价固定蛋白最近引起很多关注，因为它能够稳定地、均匀地且高密度地固定各种蛋白。其方法是将所关注的蛋白与标签蛋白共表达，再利用后者与其被固定的底物分子共价地且选择性地反应。比如，Kindermann等报道了一种通过不可逆地将O6-苄基鸟嘌呤衍生物的烷基连接到hAGT半胱氨酸残基之一来固定hAGT-标签的共价方法。

GST-标签蛋白具有高底物亲合性，然而，已知的GST标签固定方法仍然基于可逆的GSH-GST结合，限制了它们的应用。

Viswanathan等报道了通过铜(I)-催化的Huisgen[3+2]环加成反应(“click”反应)将在C-末端半胱氨酸残基上，用炔改性的GST蛋白共价固定到玻璃表面上的策略。尽管实现了共价和定向结合，但是铜催化剂可引起某些不稳定的蛋白的变性或沉淀，因此有可能在固定后降低了蛋白活性。另外，相比于传统的GSH-GST方法，将炔基团引入GST蛋白是耗时的且高成本的。

发明内容

本发明的目的在于提供一类小分子物质，其能够通过位置选择性共价键合的方式共价固定蛋白，特别是sjGST-标签化的蛋白。

本发明的目的还在于提供一类能够以相对简单的方法合成的具有氟磺酰基的小分子，当用它们处理sjGST-标签化的蛋白时能够共价地、选择性地、不可逆地标记sjGST。

具体来说，本发明提供了下述技术方案：

技术方案1.式I的化合物：

其中，

R₁是苯基的任选取代基；

R₂是Ar的任选取代基；

m是0、1、2、3、4；

n是0、1、2、3、4；

连接基团是任选被取代的，并且是由下述A组中的0-15个和下述B组中的一个组成的三价基团，

A组：─O─、─NH─、─S─、─SO─、─SO₂─、─CO─、─C(═NH)─、─C(═S)─、─C(═SO)─、─C(═SO₂)─、─C_1-10亚烷基─、─C_3-10亚环烷基─、与─(3-10)元亚杂环烷基─，

B组：─N═、─C_1-10次烷基═、─C_3-10次环烷基═、与─(3-10)元次杂环烷基═；