[发明专利]酮苯丙氨酸钙中杂质含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，涉及一种酮苯丙氨酸钙原料药的杂质含量的测定方法。

背景技术

复方α-酮酸片为复方制剂，含有4种α-酮酸、1种α-羟酸和5种人体必需氨基酸，其中酮酸和羟酸以钙盐形式存在。德国Fresenius公司以开同为商品名，1996年首次在德国上市，临床上用于慢性肾衰患者的营养，延缓肾衰进展，纠正代谢紊乱的药物。

酮苯丙氨酸钙(Calcium phenylpyruvate，简称KTP)，是复方α-酮酸片的主要原料之一，其化学名称为2-氧代-3苯基丙酸钙，结构如式I所示，具有降低血氨、纠正氨基酸不平衡、改善慢性肾衰等效果。

目前酮苯丙氨酸钙的合成工艺普遍采用乙内酰脲和苯甲醛反应制得，国内现行标准中采用离子交换色谱法对酮苯丙氨酸钙原料药有关物质进行检查，但仅对其杂质含量进行控制，并未确定有关物质(即该杂质)结构(国家食品药品监督管理局标准YBH01512010，有关物质部分)。

并且，现有的检测分析方法(如离子交换色谱法)都采用主成分自身对照法，该方法适用于无法获得对照品，且杂质与主成分在同一波长下吸收相应因子接近时方可实现较为准确的定量，现有的色谱分析都忽略了杂质成分相应因子的问题，采用不加校因子的主成分自身对照法，存在一定局限性，无法对杂质进行准确的定量测定，因而无法科学的对酮苯丙氨酸钙原料药进行质量控制。

本发明人对该路线合成的产物进行高效液相色谱分析发现有一个明显杂质存在，在氧化条件下该杂质显著增加，该杂质即为酮苯丙氨酸钙合成中的副产物，也为氧化降解产物。

为了严格控制原料药的质量，本发明人认为有必要对杂质进行化学结构确认，获得杂质对照品，并提供一种高准确度的杂质检测方法，以便精确指导生产工艺，提高产品安全性。

公开号为CN102297924B，中国专利号为201110168695.0，名称为3-异苯并二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸和2-氯甲基苯乙酸杂质含量的高效液相色谱分析方法的中国专利公开了一种3-异苯并二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸和2-氯甲基苯乙酸杂质含量的高效液相色谱分析(HPLC)方法，所述3-异苯并二氢吡喃酮采用重量百分比浓度为20％～40％乙腈水溶液溶解，配制的样品浓度为10mg/ml～50mg/ml，采用反相高效液相色谱法，测定3-异苯并二氢吡喃酮中邻甲基苯乙酸和2-氯甲基苯乙酸杂质含量。本发明采用C18反相色谱柱，以液相色谱方法准确测定3-异苯并二氢吡喃酮中邻-甲基苯乙酸和2-氯甲基苯乙酸杂质的含量。

专利201110168695.0的缺陷在于没有完整的做方法学考察，以验证方法的重现性及准确可靠性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酮苯丙氨酸钙中杂质含量的检测方法。

本发明是针对之前采用离子交换色谱法分析酮苯丙氨酸钙杂质，无法用于苯乙酸杂质制备以确定结构，因此才建立反向法相色谱法测定药物中降解杂质/副产物，对于酮苯丙氨酸钙来说，首次采用反相色谱法测定杂质—苯乙酸的含量。

本申请的技术方案克服了现有技术中杂质结构不明确、杂质定量方法不准确的缺点，提供一种高准确度的杂质检测方法，利于全面客观评价酮苯丙氨酸钙原料药的质量，保证人体用药安全。

本发明人对前期研究中发现酮苯丙氨酸钙的合成工艺中产生的明显杂质进行化学结构的确认，该杂质为苯乙酸。

本发明提供一种酮苯丙氨酸钙原料药的杂质，该杂质为苯乙酸，其结构如式Ⅱ所示：

该杂质是发明人对反应过程分析后进行预测，并通过制备液相色谱制备得到对照品，用液相-质谱仪分析、核磁共振确证结构。

进一步地，本发明人通过液相色谱方法获得苯乙酸的对照品，再进行酮苯丙氨酸钙原料药的质量控制研究。

本发明提供了一种酮苯丙氨酸钙中苯乙酸杂质含量的检测方法，具体步骤为：

精密称取酮苯丙氨酸钙原料药适量，加水超声溶解，用水稀释成酮苯丙氨酸钙浓度为1mg·mL^-1的供试品溶液；

精密称取苯乙酸对照品适量，加水超声溶解，用水稀释成苯乙酸浓度为20μg·mL^-1的对照品溶液；

按照以下色谱条件对供试品溶液进行分析，按外标法以峰面积计算苯乙酸含量。

色谱条件为：

(1)色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱