[发明专利]控制曲霉属丝状真菌形成菌丝球的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生工程，特别涉及一种控制曲霉属丝状真菌形成菌丝球的方法。

技术背景

曲霉属丝状真菌广泛分布在谷物、空气、土壤和各种物品上。比较常见的有黑 曲霉、米曲霉、构巢曲霉等。它们在生物技术发展过程中发挥了很大的作用，很多 产品来自于丝状真菌的初级和次级代谢产物。黑曲霉已经用来生产柠檬酸和很多酶 类，例如市场上常见淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶、葡萄糖酶、葡萄糖苷酶、葡 萄糖氧化酶、过氧化氧酶、半乳糖苷酶、木聚糖酶、柚苷酶、单宁酶、脂肪酶、植 酸酶、蛋白酶、果胶酶等都可以从曲霉属丝状真菌中获得。曲霉属丝状真菌可以根 据培养基的不同而产不同种酶的组合，如纤维素酶、木聚糖酶和果胶酶。美国食品 和药物管理局(FDA)已经认定多种来自曲霉属丝状真菌的产物是安全的，所以曲 霉属丝状真菌的产物被广泛用于食品级产品中。

在深层培养过程中曲霉属丝状真菌在一定条件下会形成菌丝球。丝状真菌以菌 丝球的形态生长有发酵液粘度低、传质好、产物产量高、菌体回收简单等优点。而 且控制一定的菌丝球大小还可以进一步避免溶氧限制、提高产物产量、减低生物反 应器的能耗。所以控制丝状真菌菌丝球的大小是一项重要的技术。丝状真菌菌丝球 还可以吸附废水中的金属离子、染料达到处理废水的目的。丝状真菌还可以和其它 单细胞微生物共成球，例如黑曲霉和多种海藻共成球后形成简单的收获方法。利用 菌丝球收获的方法节约了单细胞微生物水处理在收获时所需要的大型耗能设备，降 低了成本。

发明内容

本发明的目的，就是为了提供一种控制曲霉属丝状真菌形成菌丝球的方法。

为了实现本发明的目的，本发明采用了以下技术方案：一种控制曲霉属丝状真 菌形成菌丝球的方法，其特征在于，包括以下步骤：

第一步、孢子的培养

将曲霉属丝状真菌接种到固体培养基上，在22℃-32℃培养箱中培养48-240h， 曲霉属丝状真菌形成孢子；

第二步、孢子悬浮液的制备

利用无菌水或者磷酸缓冲液洗涤孢子，得到孢子悬浮液，分装到灭菌后的小管 中，在2-6℃下保存待用；

第三步、控制曲霉属丝状真菌形成菌丝球

将孢子悬浮液接种到察氏培养基中，接种孢子浓度为7.23×10⁵/L～8.68×10⁸/L； 然后，置于旋转式摇床中培养，培养条件为：pH3.0～8.0，温度22-35℃，摇床转 速100-200rpm；在察氏培养基中培养48h后，曲霉属丝状真菌形成菌丝球。

所述曲霉属丝状真菌包括黑曲霉、米曲霉或构巢曲霉。

所述固体培养基包括PDA琼脂培养基、含2％琼脂的察氏培养基或YPD固体 培养基。

上述第三步在察氏培养基中的培养时间为48-168h。

所述察氏培养基的制作方法如下：取glucose25.0g、NaNO₃3.0g、K₂HPO₄1.0 g、KCl0.5g、MgSO₄·7H₂O0.5g和FeSO₄·7H₂O0.01g，加去离子水至1L；再用 1mol/LHCl和1mol/LNaOH调节pH为5.5。