[发明专利]一种人源溶菌酶蛋白纯化方法

权利要求书

1.一种人源溶菌酶蛋白纯化方法，其特征在于，该人源溶菌酶蛋白纯化方法包括以下步骤：

1)发酵液的前处理，包括去除人溶菌酶溶液中的固体杂质和调整酸碱度，将含重组人源溶菌酶的发酵液调pH至6.5；去除杂质时，先将溶液离心，收集上清，然后使用中空纤维超滤膜处理上清液，进一步除去样品中的小颗粒物质；

2)Bestarose MMC Diamond捕获，加入Bestarose MMC Diamond洗脱缓冲液B，调节样品电导使其与平衡缓冲液A电导一致，达到43ms/cm,即为Bestarose MMC Diamond柱上样原样，Bestarose MMC Diamond捕获需要根据目标产品的理化性质，选择合适的色谱条件，用阳离子交换介质作为人溶菌酶的纯化介质,采用的层析柱和缓冲液的条件如下：

层析柱：BXK 50/30，Vt＝300mL；

平衡缓冲液A：0.4M NaCl，20mM磷酸盐缓冲液，pH6.5；

洗脱缓冲液B：1.5M NaCl，20mM磷酸盐缓冲液，pH6.5；

平衡缓冲液A平衡5个柱体积，至层析柱流出液的pH、电导与平衡缓冲液一致，将上述处理后的上样原样以30mL/min流速上样，上样结束后用平衡缓冲液A清洗3～5个柱体积直到基线稳定，即所有未结合的物质都被冲洗出分离柱，然后用洗脱缓冲液B洗脱目的蛋白，根据UV280洗脱峰收集样品；

3)Bestdex G-25缓冲液置换，浓缩前对样品进行缓冲液置换，使其电导小于10ms/cm，采用的层析柱和缓冲液的条件如下：

层析柱：BXK 200/500，Vt＝5L；

平衡缓冲液：20mM NaAC，pH4.75；

平衡缓冲液平衡2 个柱体积，至层析柱流出液的pH、电导与平衡缓冲液一致，将Bestarose MMC Diamond 洗脱样品以200mL/min 流速上样，上样体积小于1.5L，上样结束后继续用平衡缓冲液清洗，根据UV280 峰收集样品；

4)浓缩目的蛋白，采用SP Bestarose FF柱进行样品浓缩，采用SP Bestarose FF柱进行样品浓缩的步骤包括：平衡缓冲液平衡3～5个柱体积，至层析柱流出液的pH、电导与平衡缓冲液一致，将置换过缓冲液的样品以20mL/min流速上样，上样结束后用平衡缓冲液清洗3～5个柱体积直到基线稳定，即所有未结合的物质都被冲洗出分离柱，然后用洗脱缓冲液洗脱目的蛋白，根据UV280洗脱峰收集样品，采用的层析柱和缓冲液的条件如下：

层析柱：BXK 50/30，Vt＝280mL；

平衡缓冲液：20mM醋酸钠，pH4.75；

洗脱缓冲液：0.15M NaCl，20mM磷酸盐缓冲液，pH7.5。

2.根据权利要求1所述的人源溶菌酶蛋白纯化方法，其特征在于，含有人溶菌酶溶液直接采用人溶菌酶溶液的发酵液。