[发明专利]一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的样品前处理方法及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测牛奶中药物残留的样品前处理方法及检测方法，尤其适用于牛奶中磺胺类药物的检测。

背景技术

目前，牛奶中磺胺类药物残留检测方法以GB/T22966-2008《牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》的方法为主，因其检测需要质谱，价格昂贵，且对化验员的水平要求较高，无法在一般中、小企业中进行推广；该方法使用危险性较高的药品-高氯酸，因为高氯酸可助燃，具强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤，会给化验室带来安全隐患。

GB29694-2013《食品安全国家标准动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定-高效液相色谱法》中检验方法适用于肌肉和肝脏组织的检测，由于牛奶与肉类化学成分的差异，使用这种方法应用于牛奶检测时回收率无法满足检测要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的样品前处理方法，安全性高，可较完全地提取牛奶样品中的磺胺类药物。

本发明的另一个目的是提供一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的方法，成本低，安全性高，检测的回收率和精密度较好。

本发明提供了一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的样品前处理方法，包括：取1至5克待测牛奶样品，加入10至30mL乙腈，涡旋混合1至5分钟，再于8000至10000转/分钟离心3至5分钟，取上清液；并向离心后的残渣中加入乙腈10至30毫升，涡旋混合1至5分钟，再于8000至10000转/分钟离心3至5分钟，取上清液；合并两次所得的上清液；将合并后的上清液置于旋蒸瓶中，在40至50℃下旋转蒸发至干；再依次用0.1至0.2mol/L盐酸水溶液2至5mL、0.1至0.2mol/L盐酸水溶液2至5mL、正己烷3至5mL和正己烷3至5mL分别清洗旋蒸瓶；所得清洗液合并至同一离心管中，涡旋混合30至120秒，再于8000至10000转/分钟离心3至5分钟；离心后弃正己烷层，取下层液；将下层液用MCX固相萃取柱净化，得到净化液；以及将净化液于40至50℃氮气吹干，再用0.1%甲酸乙腈溶液1.0至5mL溶解；其中0.1%甲酸乙腈溶液的配制方法为：取0.1%甲酸水溶液830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。

在样品前处理方法的一种示意性实施方式中，用MCX固相萃取柱净化的步骤为：先将MCX固相萃取柱依次用甲醇2至5mL和0.1mol/L盐酸水溶液2至5mL活化；将下层液过活化后的MCX固相萃取柱，控制流速1至2mL/分钟；依次用0.1至0.2mol/L盐酸水溶液1至2mL和50%甲醇乙腈溶液2至4mL淋洗MCX固相萃取柱；50%甲醇乙腈溶液的配制方法为：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀释至100mL；以及最后用4mL洗脱液洗脱，洗脱液的配制方法为：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀释至100mL。

在样品前处理方法的一种示意性实施方式中，磺胺类药物包括：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺异噁唑、磺胺甲噁唑、苯酰磺胺和磺胺二甲氧哒嗪。

本发明还提供了一种液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的方法，其特征在于，先根据上述的样品前处理方法对待测牛奶样品进行前处理，再用液相色谱法进行检测。

在液相色谱法检测牛奶中磺胺类药物残留的方法的一种示意性实施方式中，液相色谱的色谱条件为：柱温箱：30至45℃；紫外检测器检测波长：270nm；进样量：20至50μL；色谱柱：C18或C8，规格为250×4.6mm，5μm；流动相：0.1%甲酸水溶液和乙腈；流速：1.0至1.5mL/分钟；洗脱梯度：