[发明专利]一株高产曲酸的米曲霉菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株米曲霉菌株及其应用，特别是一株高产曲酸的米曲霉菌株及其应用。

背景技术

在人体中，酪氨酸酶能催化酪氨酸与氧自由基经复杂氧化、聚合，最后合成黑色素。曲酸及其衍生物能通过抑制酪氨酸酶的活性而抑制黑色素形成，而且安全无毒，因而在化妆品和食品防腐保鲜等领域具有广泛的用途。在医药上，曲酸可以作为生产头孢类抗生素的中间体。同时，可作为合成香料中间体、杀虫剂原料等，在食品、化妆品、医药、农业、化工等行业有广泛的应用前景。许多曲霉如米曲霉、黄曲霉、疏展曲霉、构巢曲霉、寄生曲霉、白曲霉、烟曲霉、巨大曲霉、灰绿曲霉等和少数青霉，如产曲酸青霉等，能代谢产生曲酸。目前，生产中普遍使用的是米曲霉和不产生黄曲霉素的黄曲霉。1998年，周卫东等人报道米曲霉2336培养6.5d后产曲酸7.45g/L(周卫东，沈育芬，陈移亮，等.曲酸生产菌的诱变选育[J].亚热带植物通讯，1998，02：12-6)。沈卫荣等于2003年报道诱变前黄曲霉C-527的曲酸产量为9.26g/L(沈卫荣，沈俭，韩丽萍，等.曲酸生产菌的复合诱变选育[J].微生物学通报，2003，04：60-64)。2006年李一婧等人于2006年报道米曲霉QA96.8在诱变前曲酸产量为4.79g/L，即使经多次紫外诱变后，曲酸产量仅上升至18.13g/L(李一婧，马伟超.曲酸生产菌种的筛选和发酵工艺条件的优化[J].中国酿造，2006，06：42-44)。沈育芬等在2001年用米曲霉2336经紫外线诱变筛选到一株突变株，曲酸产量达到26.36g/L(沈育芬，陈移亮，周卫东，等.曲酸产生菌F31012变株的选育及发酵条件的研究[J].福建师范大学学报(自然科学版)，2001，02：73-77)。因此，筛选曲酸高产优良菌株具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一株米曲霉菌株(Aspergillus oryzae QS)，已于2014年9月20日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC M 2014436，保藏地址为中国，武汉，武汉大学中国典型培养物保藏中心。

所述产曲酸米曲霉从土壤中筛选得到，其保藏条件如下：用无菌蒸馏水将斜面上的孢子洗出，玻璃珠打散后用带脱脂棉漏斗过滤制备孢子悬浮液。每个甘油管里面加入0.5mL孢子悬浮液和0.5mL 30％甘油，放入-70℃低温冰箱保存。

固态平板培养基为(w/v)：5％葡萄糖，1％玉米淀粉，0.5％酵母膏，0.5％KH₂PO₄，0.25％MgSO₄·7H₂O，琼脂粉2％，自然pH，灭菌。

液体种子培养基为(w/v)：10％葡萄糖，2％玉米淀粉，1％酵母膏，0.5％KH₂PO₄，0.25％MgSO4·7H₂O，用稀HCl调pH至4.0，灭菌。

液体发酵培养基为(w/v)：12％葡萄糖，1.0％豆饼粉，0.3％酵母膏，0.2％KH₂PO₄，0.02％MgSO₄·7H₂O，自然pH，灭菌。

米曲霉的培养条件为：将已保藏甘油管的米曲霉孢子在固体平板培养基上划线，30℃培养5d后将孢子接入液体种子培养基，30℃，200rpm，摇床培养27h。以10％(v/v)的接种量将培养好的液体种子接种到发酵产酸培养基中，30℃，200rpm，摇床培养。

将产曲酸米曲霉发酵后的发酵液，10000rpm离心2min，采用三氯化铁比色法测定离心后发酵上清液的曲酸产量。在发酵2d后开始生产曲酸，7d后曲酸产量可达25g/L。

本发明自土壤中筛选出一株产曲酸米曲霉，是一株曲酸产量较高的野生菌株。该菌株生产的曲酸可广泛应用于食品防腐保鲜、化妆品、医药、农业、化工等行业，具有重要的生产应用价值。

附图说明：

图1：曲酸测定标准曲线

图2：米曲霉筛选颜色反应及菌落形态

图3：曲酸发酵生产

具体实施方式：

实施例1：三氯化铁测定曲酸含量方法

曲酸测定标准曲线的制作：

1)0.1％曲酸标准溶液的制备：准确称取曲酸标准品0.1000g于100mL容量瓶中，加入适量蒸馏水使之完全溶解，并用蒸馏水定容至100mL，得到1mg/mL的曲酸标准溶液。