[发明专利]β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原、宽谱特异性抗体及其应用在审

专利信息
申请号: 201410564625.0 申请日: 2014-10-22
公开(公告)号: CN104311659A 公开(公告)日: 2015-01-28
发明(设计)人: 邵科峰;赵波;张红琳;任鹏飞;常其沛 申请(专利权)人: 南京师范大学
主分类号: C07K14/765 分类号: C07K14/765;C07K14/77;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/558;G01N33/543
代理公司: 南京知识律师事务所 32207 代理人: 韩朝晖
地址: 210046 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 肾上腺素 受体 激动剂 抗原 特异性 抗体 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原,其特征在于:所述的多簇抗原是以沙丁胺醇和莱克多巴胺为半抗原,与载体蛋白偶联得到的沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物;所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白。

2.根据权利要求1所述的β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原,其特征在于:所述的多簇抗原以沙丁胺醇和莱克多巴胺为半抗原,牛血清白蛋白或卵清蛋白为载体蛋白,按以下步骤制备得到:

1)在载体蛋白上以混合酸酐法偶联沙丁胺醇半抗原,再进行纯化:

将0.2mmol硫酸沙丁胺醇溶于5~10ml无水乙醇中,加入0.2mmol戊二酸酐,室温下反应3~5h,离心,将下层固体溶于5~10ml N,N-二甲基甲酰胺,加入0.2mmol三正丁胺和0.2mmol氯甲酸异丁酯,继续反应1~3h;将上述反应液加入到5~10ml含有5~10mg/ml载体蛋白的磷酸缓冲溶液中,室温反应过夜;将上述反应液用磷酸缓冲溶液透析3~6次,冷冻干燥,即可得到沙丁胺醇-载体蛋白偶联物冻干粉;

2)在步骤1)的产物上以混合酸酐法偶联莱克多巴胺半抗原,再进行纯化:

将0.2mmol戊二酸酐溶于5ml吡啶中,加入0.2mmol盐酸莱克多巴胺,室温反应10~20h,蒸干溶剂,将所得油状物溶于5~10ml N,N-二甲基甲酰胺,加入0.2mmol三正丁胺和0.2mmol氯甲酸异丁酯,继续反应1~3h;将上述反应液加入到5~10ml含有5~10mg/ml沙丁胺醇-载体蛋白偶联物的磷酸缓冲溶液中,室温反应过夜;将上述反应液用磷酸缓冲溶液透析3~6次,冷冻干燥,制得所述的β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原。

3.一种β-肾上腺素受体激动剂宽谱特异性抗体,其特征在于,所述宽谱特异性抗体由β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原通过动物免疫获得。

4.根据权利要求3所述的β-肾上腺素受体激动剂宽谱特异性抗体,其特征在于,所述宽谱特异性抗体是由沙丁胺醇-莱克多巴胺-牛血清白蛋白通过动物免疫获得的多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb。

5.一种用于β-肾上腺素受体激动剂多残留检测的酶联免疫试剂盒,其特征在于,所述的酶联免疫试剂盒包含下述1)、2)、3)或4)中任一所述的试剂:

1)酶联免疫试剂盒中包括沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物、宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb和酶标记羊抗兔IgG;其中,所述偶联物作为包被原;

2)酶联免疫试剂盒中包括沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物、宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb的酶标记物;其中,所述偶联物作为包被原;

3)酶联免疫试剂盒中包括沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物的酶标记物、宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb和羊抗兔IgG;其中,所述羊抗兔IgG作为包被原;

4)酶联免疫试剂盒中包括沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物的酶标记物、宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb;其中,所述宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb作为包被原。

6.根据权利要求5所述的酶联免疫试剂盒,其特征在于,所述酶联免疫试剂盒还包括β-肾上腺素受体激动剂标准品溶液、显色液、终止液、洗涤液、稀释液和提取液,所述β-肾上腺素受体激动剂为克伦特罗、沙丁胺醇或莱克多巴胺。

7.一种用于β-肾上腺素受体激动剂多残留检测的免疫胶体金试纸,由PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成,其特征在于,所述的金标垫包被有胶体金标记的第二种属动物蛋白与宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb的混合物,或第二种属动物蛋白与沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物的混合物;硝酸纤维素膜上包被有沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物或SAL-RAC-BSAAb构成的检测线和包被抗第二种属动物蛋白IgG构成的质控线;所述第二种属动物为与免疫动物不同的动物。

8.根据权利要求7所述的免疫胶体金试纸,其特征在于,所述β-肾上腺素受体激动剂为克伦特罗、沙丁胺醇或莱克多巴胺。

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