[发明专利]β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原、宽谱特异性抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学和分析技术领域，涉及一种β-肾上腺素受体激动剂(以下简称β-激动剂)多簇抗原和宽谱特异性抗体及其制备和应用，特别是涉及一种以所述的宽谱特异性抗体为核心的试剂盒及胶体金试纸。

背景技术

β-肾上腺素受体激动剂，简称β-激动剂，是动物源性食品中检出率最高、危害最严重的化学性残留危害物，其中最著名的就是克伦特罗(clenbuterol，CL)，俗称“瘦肉精”。上世纪80年代，美国脂胺公司的科研人员意外发现，“瘦肉精”能增强动物脂肪分解，促进蛋白质合成，大大缩短肉品上市周期，显著提高胴体瘦肉率、饲料回报率和经济效益。随后在世界各地迅速推广，80年代后期，传入我国并在许多地区的饲料加工企业和养殖业推广使用，很快成为养殖业应用最广泛的“添加剂”。

“瘦肉精”除克伦特罗外，还包括沙丁胺醇(salbutamol，SAL)、莱克多巴胺(ractopamine，RAC)等20多个结构和性质相类似的化合物。这类化合物进入体内后选择性作用于腺苷酸环化酶，导致人体产生低敏感现象，哮喘发生率和发病程度升高；还可导致内分泌紊乱，诱发染色体畸变及恶性肿瘤，严重时可致人死亡。因此我国和世界上大多数国家都明文禁止“瘦肉精”用作饲料添加剂。

目前，β-激动剂类兽药残留的检测方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、酶联免疫法(ELISA)和荧光免疫法(FIA)等。

色谱法是β-激动剂兽药残留的主要检测方法，但是色谱法检测成本高、操作复杂、大量的阴性样品重复检测；而酶联免疫法具有特异性强、样品前处理简单等优点，但特异性强的特点同时也决定了它的致命缺点：一种酶联免疫试剂盒或试纸条只能检测一种兽药残留，而无法检测其它的同类兽药残留，这就是容易出现漏检的原因(如2011年轰动全国的“双汇瘦肉精”事件)；此外，随着β-激动剂多种替代品的出现，如果进行完全检测，一个样品需要使用多种检测产品，大大提高了检测成本和工作时间，失去了快速筛选的意义。

多残留免疫分析能同时检测一类药物残留，其低成本、高通量、快速现场的优点是现有的色谱法和特异性免疫方法无法比拟的，是未来食品安全检测领域的关键技术之一，逐渐引起重视。

发明内容

本发明的目的在于提供一种β-激动剂多簇抗原、宽谱特异性抗体及其制备和应用。

本发明采用以下技术方案：

一种β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原，是以沙丁胺醇和莱克多巴胺为半抗原，与载体蛋白偶联得到的沙丁胺醇-莱克多巴胺-载体蛋白偶联物；所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白。

所述多簇抗原为SAL-RAC-BSA或SAL-RAC-OVA，以沙丁胺醇和莱克多巴胺为半抗原，牛血清白蛋白或卵清蛋白为载体蛋白，按以下步骤制备得到：

1)在载体蛋白上以混合酸酐法偶联沙丁胺醇半抗原，再进行纯化：

将0.2mmol硫酸沙丁胺醇溶于5～10ml无水乙醇中，加入0.2mmol戊二酸酐，室温下反应3～5h，离心，将下层固体溶于5～10ml N，N-二甲基甲酰胺，加入0.2mmol三正丁胺和0.2mmol氯甲酸异丁酯，继续反应1～3h；将上述反应液加入到5～10ml含有5～10mg/ml载体蛋白的磷酸缓冲溶液中，室温反应过夜；将上述反应液用磷酸缓冲溶液透析3～6次，冷冻干燥，即可得到沙丁胺醇-载体蛋白偶联物冻干粉；

2)在步骤1)的产物上以混合酸酐法偶联莱克多巴胺半抗原，再进行纯化：

将0.2mmol戊二酸酐溶于5ml吡啶中，加入0.2mmol盐酸莱克多巴胺，室温反应10～20h，蒸干溶剂，将所得油状物溶于5～10ml N，N-二甲基甲酰胺，加入0.2mmol三正丁胺和0.2mmol氯甲酸异丁酯，继续反应1～3h；将上述反应液加入到5～10ml含有5～10mg/ml沙丁胺醇-载体蛋白偶联物的磷酸缓冲溶液中，室温反应过夜；将上述反应液用磷酸缓冲溶液透析3～6次，冷冻干燥，即制得所述的β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原。

本发明还涉及一种β-肾上腺素受体激动剂宽谱特异性抗体，其特征在于，由所述的β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原通过动物免疫获得。

沙丁胺醇-莱克多巴胺-牛血清白蛋白(SAL-RAC-BSA)通过动物免疫可制备抗沙丁胺醇-莱克多巴胺-牛血清白蛋白抗体，即宽谱特异性多克隆抗体SAL-RAC-BSAAb。