[发明专利]一种制备荧光单标记的眼镜蛇神经毒素的方法在审
| 申请号： | 201410566748.8 | 申请日： | 2014-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN104311651A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 李范珠;李元园;胡亦沁;阮叶萍;陈翠微;费伟东;韩顺平 | 申请（专利权）人： | 浙江中医药大学;浙江医学高等专科学校 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/20;C07K1/13 |
| 代理公司： | 杭州金道专利代理有限公司 33246 | 代理人： | 赵芳;冷红梅 |
| 地址： | 310053 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 荧光 标记 眼镜蛇 神经 毒素 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种制备荧光单标记的眼镜蛇神经毒素的方法，所述方法包括：以硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)为衍生剂，眼镜蛇神经毒素(Neurotoxin，NT)与硫氰酸荧光素摩尔用量之比为1:1-1.2，于20-40℃下、在pH为8.4-8.6的硼酸缓冲液中进行衍生化反应8-10h，反应液经分离纯化得到荧光单标记的眼镜蛇神经毒素。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述反应液分离纯化采用半制备液相色谱分离，色谱条件为：采用反向菲罗门Jupiter 5u C18300A(10.0×250mm)色谱柱；流动相：流动相A为质量浓度为0.1％的TFA水溶液，流动相B为质量浓度为0.1％的TFA乙腈溶液，以3mL·min-1流速进行梯度洗脱；色谱仪上装有荧光检测器，荧光检测激发波长为445nm，发射波长为525nm；进样量为200μL；柱温为35℃。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述衍生化步骤如下：取眼镜蛇神经毒素和硫氰酸荧光素分别溶于pH 8.4的硼酸缓冲液和丙酮中，眼镜蛇神经毒素与硫氰酸荧光素摩尔用量之比为1:1，在室温下反应8h后，反应液进行液相色谱分离，收集19.651min处峰，真空冷冻干燥，即得所述荧光单标记的眼镜蛇神经毒素。
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