[发明专利]高温期间养殖水体降碱脱氮的生物制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种高温期间养殖水体降碱脱氮的生物制剂，其特征在于：按重量份计包括：短乳杆菌的高浓度培养物45~55份，脱氮副球菌的高浓度培养物35~50份，乳酸3~5份，聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯1~2份。

2.根据权利要求1所述的高温期间养殖水体降碱脱氮的生物制剂的制备方法，其主要步骤如下：

（1）短乳杆菌的高浓度培养物制备：从试管斜面上取一环短乳杆菌菌苔，接种到50 mL经过灭菌处理的MRS液体培养基中，于35 ℃静置培养40 h；然后将其接入5 L经过灭菌处理的MRS液体培养基中，于35 ℃静置培养30 h，制成菌种种子液备用；

在0.5吨不锈钢发酵罐中加入总体积350 L的液体发酵培养基，经121 ℃灭菌处理15 min后冷却备用；

将上述菌种种子液接入不锈钢发酵罐，在35 ℃、转速120 r·min^-1的条件下培养30 h，待菌种种子液浓度≥10⁹CFU·mL^-1时放入经灭菌的500 L桶中备用；

（2）脱氮副球菌的高浓度培养物制备：从试管斜面上取一环脱氮副球菌菌苔，接种到50 mL经过灭菌处理的LB液体培养基中，于30 ℃静置培养30 h；然后将其接入5 L经过灭菌处理的LB液体培养基中，于30 ℃静置培养28h，制成菌种种子液备用；

在0.5吨不锈钢发酵罐中加入总体积350 L的液体发酵培养基，经121 ℃灭菌15 min后冷却备用；

将上述菌种种子液接入不锈钢发酵罐，在30 ℃、转速120 r·min^-1的条件下培养30 h，待菌种种子液浓度≥10⁹CFU·mL^-1时放入经灭菌的500 L桶中备用；

（3）混合：先将短乳杆菌的高浓度培养物和脱氮副球菌的高浓度培养物混合，然后加入乳酸，最后加入聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯，混匀后包装。

3.根据权利要求2所述的高温期间养殖水体降碱脱氮的生物制剂的制备方法，其特征在于：在所述步骤（1）中，所述的MRS液体培养基包括：牛肉膏10 g·L^-1，蛋白胨10 g·L^-1，酵母膏5 g·L^-1，葡萄糖 5 g·L^-1，柠檬酸二胺2 g·L^-1，吐温80 1 g·L^-1，乙酸钠5 g·L^-1，磷酸氢二钾2 g·L^-1，硫酸镁0.2 g·L^-1、硫酸锰0.05 g·L^-1，碳酸钙20 g·L^-1，将所述MRS液体培养基的pH调节至6.5，经121℃灭菌处理15 min后冷却备用。

4.根据权利要求2所述的高温期间养殖水体降碱脱氮的生物制剂的制备方法，其特征在于：在所述步骤（2）中，所述的LB液体培养基为基础富集培养基，包括蛋白胨10 g·L^-1，酵母膏5 g·L^-1，NaCl 10 g·L^-1 ，将所述LB液体培养基的pH调节至7.0，经121℃灭菌处理20min后冷却备用。

5.根据权利要求2所述的高温期间养殖水体降碱脱氮的生物制剂的制备方法，其特征在于：所述的液体发酵培养基，其组份比例按重量份数计包括：糖蜜（糖分含量≥55%）15份、大豆粉5份、鲜鱼膏5份、酵母膏5份、乙酸钠2份、硫酸镁 0.1份、磷酸氢二钾 1.0份、水66.9份，将所有组份于室温条件下在不锈钢发酵罐中溶解混合，将所述液体发酵培养基的pH值调节至6.5~6.8，经121 ℃灭菌处理15 min，冷却后备用。