[发明专利]一种改造蛋白折叠分泌途径增强葡萄糖氧化酶分泌的方法

权利要求书

1.一种增强葡萄糖氧化酶分泌的方法，是在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达葡萄糖氧化酶基因GOD的基础上，进一步改造蛋白折叠分泌途径；所述蛋白折叠分泌途径包括三个模块，其中，模块一包括囊泡运输基因SSA4、SSO2、SEC53、BMH2，ERAD基因HRD1、UBC1；模块二包括内质网中折叠基因KAR2、CNE1、ERO1；模块三是胁迫应激反应基因GCN4；所述改造，是表达三个模块中的任意一个基因，或同时表达模块一中的任意一个基因及模块二中任意一个基因，或同时表达模块一至三中的各一个基因。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，SSA4基因的核苷酸序列如Gene ID:8199979所示，SSO2基因的核苷酸序列如Gene ID:8197744所示，SEC53基因的核苷酸序列如Gene ID:8199158，BMH2基因的核苷酸序列如Gene ID:8198501所示，HRD1基因的核苷酸序列如Gene ID:8201066，UBC1基因的核苷酸序列如Gene ID:8200711所示，KAR2基因的核苷酸序列如Gene ID:8198455所示，CNE1基因的核苷酸序列如Gene ID:8198102所示，GCN4基因的核苷酸序列如Gene ID:8197788所示。

3.一种葡萄糖氧化酶分泌表达增强的重组毕赤酵母，是在表达葡萄糖氧化酶基因的基础上，改造了蛋白折叠分泌途径，所述蛋白折叠分泌途径包括三个模块，其中，模块一包括囊泡运输基因SSA4、SSO2、SEC53、BMH2，ERAD基因HRD1、UBC1；模块二包括基因内质网中折叠基因KAR2、CNE1、ERO1；模块三是胁迫应激反应基因GCN4；所述改造，是表达三个模块中的任意一个基因，或同时表达模块一、二中各一个基因，或同时表达模块一至三中的各一个基因。

4.根据权利要求3所述的重组毕赤酵母，其特征在于，以pGAPZαA衍生质粒为表达载体表达蛋白折叠分泌途径基因；以去除HIS4和kan^R的pPIC9k表达葡萄糖氧化酶基因。

5.根据权利要求3所述的重组毕赤酵母，其特征在于，所述pGAPZαA衍生质粒包括去除pGAPZαA的α-mating信号肽得到的pGAPZ，去除pGAPZαA的α-mating信号肽并将Shble替换成HIS4得到的pGAPH，去除pGAPZαA的α-mating信号肽并将Shble替换成kan^R得到的pGAPK。

6.根据权利要求5所述的重组毕赤酵母，其特征在于，以衍生质粒pGAPZ表达模块一的基因，以衍生质粒pGAPH表达模块二的基因，以衍生质粒pGAPK表达模块三的基因。

7.根据权利要求3所述的重组毕赤酵母，其特征在于，是在P.pastorisGS115中表达葡萄糖氧化酶基因GOD，并共表达内质网基因CNE1或囊泡运输基因SEC53或ERAD基因HRD1或胁迫应激反应基因GCN4。

8.根据权利要求3所述的重组毕赤酵母，其特征在于，是在P.pastoris GS115中表达葡萄糖氧化酶基因GOD，并共表达模块一SEC53基因及模块二KAR2基因。

9.根据权利要求3所述的重组毕赤酵母，其特征在于，在P.pastoris GS115中表达葡萄糖氧化酶基因GOD，并共表达模块一SEC53基因、模块二CNE1基因及模块三GCN4基因。

10.权利要求3所述的重组毕赤酵母在葡萄糖氧化酶生产中的应用。