[发明专利]一种快速抗菌试验方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于微生物试验领域，具体是涉及一种快速抗菌试验方法及试剂盒。

背景技术

抗菌试验是用于检测和评价抗菌剂抗菌效果的一种试验方法，也可用来筛选新的抗菌药物和用于检测细菌耐药性。

现行的标准抗菌试验方法是基于琼脂培养平皿上计算菌落数变化情况来判定抗菌剂性能的，试验周期比较长。该标准抗(抑)菌产品抗(抑)菌性能试验方法的操作步骤如下：

将试验细菌(金黄色葡萄球菌:ATCC 6538或大肠杆菌:8099或ATCC 25922)经24h斜面培养，培养物用PBS洗下，制成菌悬液,要求的浓度为：用100μl滴于5ml对照样液内(50X稀释)，回收菌数为1×104～9×104cfu/ml。

取灭菌过被试样液(5ml)和对照样液(5ml)(与试样同质材料，同等大小，但不含抗菌剂，且经灭菌处理)各4管。

取上述菌悬液，分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μL(50X稀释)，均匀混合，开始计时，作用2、5、10、20min，用无菌镊分别将样液(0.5mL)投入含5mLPBS的试管内(10X稀释)，充分混匀，再作适当稀释，然后取其中2～3个稀释度，分别吸取0.5mL，置于两个平皿，用凉至40～45℃的营养琼脂培养基15mL作倾注(30X稀释)，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48h(细菌)作活菌菌落计数。

试验重复3次，按下式计算抑菌率：X＝(A-B)/A×100％。式中：X为抗(抑)菌率，％；A――对照样品平均菌落数；B――被试样品平均菌落数。

评价标准：X≥50％～90％为抑菌率，产品有抑菌作用，X≥90％为抗菌率，产品有抗菌作用。

该标准方法试验周期比较长，约需48h，还有阴性对照组(不含抗菌剂)菌落数不好控制，一般每个阴性对照组平皿菌落数在100-900之间比较好，太低或太高都将影响定量。因此，现行的抗(抑)菌试验方法不适合生产线上中间产品或半成品的快速检测，也不适合大量样品的高通量筛查。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种快速抗菌试验方法及试剂盒，能够快速、简便的检测试样的抗菌能力，并具有高通量、低成本的优势。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种快速抗菌试验试剂盒,包括无菌多孔检测板、保湿保温培养盒、培养液、试验菌、阳性对照抗菌剂，无菌多孔检测板含有3个或3个以上大小均等的检测孔，检测孔底部为厚薄一致、质地均匀的透明材料，保湿保温培养盒由盒身和盒盖组成，盒身内能够平放1-10个检测板，培养液为试验菌生长所需培养液。

优选的，所述无菌多孔检测板含有3行5列共15个检测孔，左边3列为试样孔，右边2列为对照孔，每个检测孔的容积为0.1-0.5ml。

优选的，所述试验菌装在带盖的瓶子内，瓶子内装有斜面琼脂培养基，试验菌长在斜面琼脂培养基上。

优选的，所述试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌或待查菌。

优选的，所述阳性对照抗菌剂是水溶性抗菌试剂。

优选的，所述试剂盒还包括3个或以上大小均等的细菌培养管，细菌培养管是透明的玻璃管或塑料管。

一种快速抗菌试验方法，在波长470nm下检测菌液的吸光度来判定试验菌的密度。

优选的，快速抗菌试验方法包括如下步骤：

(1)试验菌液准备：试验菌液的OD470达到0.5-0.8；

(2)试样液及对照液准备；

(3)抗菌反应及终止；

(4)检测抗菌效果：将菌液起始OD值控制在OD470为0.1-0.3，通过在470nm波长下检测菌液在后续培养过程中的吸光度变化来判定试样的抗菌效果。

优选的，快速抗菌试验方法包括如下步骤：

(1)试验菌液准备：挑取经24h斜面培养的试验菌或过夜摇菌培养的试验菌，用培养液稀释至OD470为0.2-0.3,然后摇床培养至OD470达到0.5-0.8；

(2)试样液及对照液准备：分别配制0.2-1ml的等量各待测试样液和对照液，对照液包括阳性对照液和阴性对照液，所述的阴性对照液是不含任何抗菌剂的溶剂；

(3)抗菌反应及终止：取0.01-0.1ml的定量试验菌液，分别与各试样液及对照液混合，试验菌液与试样液或对照液的混合体积比例为1：2-1：10；混合后计时，反应1-20min，然后，离心、除去上清、加入0.2-5ml的等量培养液重悬以终止反应；