[发明专利]一种反硝化细菌及其发酵生产方法

权利要求书

1.一种反硝化细菌，其特征在于，为JSHD01地芽孢杆菌，具有序列表SEQ ID  NO：1 所示的序列，保藏于中国微生物菌种保藏管理委托员会普通微生物保藏中心，拉丁文学名为 Geobacillus pallidas，保藏编号为CGMCC NO 7270 保藏日期为 2013年3月5日。

2.一种权利要求1所述的反硝化细菌的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将所述CGMCC NO 7270反硝化细菌接种在固体培养基上，50—60℃静止培养3-4天以形成反硝化细菌芽胞；

2）将步骤1）中培养过的固体培养基表面用无菌水洗涮，获得反硝化细菌孢子悬浮液，显微镜镜检计数芽胞含量>1×10¹⁰cfu/mL；将悬浮液经70-75℃水浴10-15min以获得发芽势强、发育一致的孢子悬浮液作为发酵生产菌种；

3）将步骤2）中孢子悬浮液生产菌种按100mL接种2000L—2400L无菌培养基的比例接种到发酵罐中进行放大培养，发酵控制条件为：接种温度63-65℃，培养温度55-60℃，罐压0.01-0.05Mpa，发酵过程中向培养基中通入经除尘杀菌后的空气，每分种通入的空气量为液体体积的0.2—0.3倍，搅拌速度为150-250rpm；发酵培养35-45h，取样镜检90%以上菌体产生芽孢后，再收集菌液获得反硝化细菌产品，所述硝化细菌产品的单位活芽胞量大于2×10⁸cfu/mL。

3.根据权利要求2所述的反硝化细菌的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤1）中固体培养基的配方及各组分的质量百分比为：硝酸钠0.15-0.2%，乙酸钠0.075-0.1%，磷酸二氢钾0.05-0.1%，葡萄糖0.075-0.1%，硫酸镁0.01-0.02%，天冬氨酸0.04-0.05%，三氯化铁0.005-0.01%，酵母膏0.01-0.012%，琼脂1.5-2.0%，余量为水，pH值7.0-7.2。

4.根据权利要求2所述的反硝化细菌的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤3）中无菌培养基的配方及各组分的质量百分比为：硝酸钠0.15-0.2%，乙酸钠0.075-0.1%，磷酸二氢钾0.05-0.1%，葡萄糖0.075-0.1%，硫酸镁0.01-0.02%，天冬氨酸0.04-0.05%，三氯化铁0.005-0.01%，酵母膏0.01-0.012%，泡敌0.05-0.1%，余量为水，pH值7.0-7.2。