[发明专利]从钩吻提取物中制备阿枯米定碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种阿枯米定碱的制备方法，特别是涉及一种从钩吻提取物中分离制备阿枯米定碱的方法。 

背景技术

钩吻(Gelsemium elegans Benth.)为马钱科胡蔓藤属植物，分中国钩吻和北美钩吻两种。我国盛产于福建、浙江、广西、广东、湖南等地，又名断肠草。其药用部位为全草。具有祛风攻毒，消肿止痛的功效。 

钩吻碱类化合物是存在于钩吻中的一类化合物，被证明在肿瘤、镇痛等方面有较好的活性。临床上用于抑制肿瘤细胞生长、治疗神经痛、局部用于扩瞳等作用，可以被认为是钩吻药效的物质基础之一。 

阿枯米定碱是自钩吻中分离得到的一种钩吻碱类化合物，其含量较高，具有一定的开发新药的潜力。其药理作用主要包括：其能抑制肿瘤细胞生长，镇痛、镇静等作用。目前尚无公开的技术关于阿枯米定碱的制备方法。虽然有相关采用高速逆流色谱仪进行制备，该制备方法操作繁琐，设备费用昂贵，制备量少，不利于工业化生产。因此，阿枯米定碱分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从钩吻提取物中制备阿枯米定碱的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。 

为解决上述技术问题，本发明的从钩吻提取物中制备阿枯米定碱的方法，包括步骤： 

(1)甲醇回流提取步骤 

将钩吻药材粗粉(过40-100目筛)加入75-90％甲醇提取，药材与甲醇比例为3:1～10:1，回流提取萃取3次，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味儿，得提取液；将提取液进行离心处理，转速为3000-8000rpm，离心后取上层清液。离心后除去了较多的杂质，简化了后续的纯化过程。 

(2)二氯甲烷萃取步骤 

将钩吻提取物的上层清液加入适量氨水调节pH值到9-11，用体积比为0.5:1～3:1的二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷层，减压回收溶剂，得萃取纯化的浸膏A； 

(3)硅胶色谱纯化步骤 

将步骤(2)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱层析硅胶柱色谱分离，并以二氯甲烷-甲醇体积比为200:1～30:1进行洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样后于紫外灯254nm下观察，合并含有阿枯米定碱的流份，减压回收溶剂，得浸膏B； 

(4)反相C18色谱纯化步骤 

将步骤(3)所得的浸膏B用15％甲醇溶解后，反相硅胶分离，40-80％的甲醇梯度洗脱，将洗脱液薄层硅胶板(GF254)点样后于紫外灯254nm下观察，合并含有阿枯米定碱的流份，减压回收溶剂，即得纯化的阿枯米定碱； 

其中，所述硅胶色谱纯化步骤与反相色谱纯化步骤的顺序可以颠倒。 

作为优选，所述步骤(1)中钩吻提取物中所用的提取溶剂为体积浓度为75％～90％的甲醇溶液；钩吻提取物的水溶液浓度相当于生药0.5g·ml^-1～1.0g·ml^-1。 

作为优选，所述二氯甲烷萃取中，钩吻提取物的水溶液与二氯甲烷溶液的体积比为0.5:1～2:1。 

作为优选，所述硅胶色谱纯化步骤中，硅胶为100-200目或200-300目柱层析硅胶或薄层层析硅胶，浸膏样品与硅胶重量比为1:50～1:200。 

作为优选，所述反相色谱纯化步骤中，浸膏样品与C18反相硅胶重量比为1:40-1:80。 

采用本发明的方法依次经(1)甲醇提取、(2)二氯甲烷萃取，(3)硅胶色谱纯化，(4)反相色谱纯化。能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备阿枯米定碱的简化工艺，可用于阿枯米定碱的工业制备。 

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。 

实施例1 

钩吻药材1kg，去除杂质后粉碎成粗粉(过40目筛)，体积浓度为75％甲醇5L回流提取3次，每次2小时，合并提取液，回收溶剂得提取液约1L；将提取液进行离心处理，转速为4000rpm，离心后取上层清液。 

将上层清液用氨水调节pH值为9，后用2L二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷层，减压回收溶剂得浸膏A约100g。