[发明专利]一种丹参多酚酸提取物指纹图谱及有关成分的含量测定方法

权利要求书

1.一种丹参多酚酸提取物指纹图谱及含量测定方法，其特征在于，步骤如下：

步骤1：采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化定量指纹图谱；

步骤2：利用质谱对步骤1中指纹图谱中的峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰；

步骤3：采用高效液相色谱可变波长检测法对步骤2中指认出的三个含量较大、活性比较明显且结构明确的指标性成分含量进行测定；

其中，步骤1的具体步骤如下：

(1)对照品溶液的制备：精密称定对照品丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B，加超纯水溶解，定容至丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM终浓度分别为200-500μg/ml，迷迭香酸、紫草酸终浓度分别为300-600μg/mL，丹酚酸B终浓度为500-1500μg/mL，即得；

(2)供试品溶液的制备：分别精密称定10-50批丹参多酚酸提取物，样品溶于超纯水，溶解后过滤，稀释成浓度为1mg/mL-5mg/mL的溶液；

(3)指纹图谱的测定：精密吸取供试品溶液1-5μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，即得；

其中，色谱条件如下：

色谱柱：UPLC C18柱；

流动相：溶剂A：水，含0.1％-0.5％甲酸；溶剂B：乙腈，含1％-5％甲醇；

梯度洗脱：

0-3min,12-18％B；3-15min,18％B；15-17min,18-20％B；17-25min,20％B；25-28min,20-23％B；28-35min,23％B；35-40min,23-40％B；40-45min,40-95％B；45-50min,95％B；

温度：30-40℃；

流速：0.2-0.3ml/min；

色谱图光谱采集范围：190～400nm；

其中，步骤3的具体步骤如下：

(1)供试品溶液制备：取丹参多酚酸提取物，精密称定，加初始流动相溶解并定容至终浓度为0.6-1.2mg/mL，摇匀，即得；

(2)混合对照品溶液制备：分别精密称取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品各适量，加初始流动相制成混合对照品溶液，得迷迭香酸质量浓度为100-150μg/mL，紫草酸质量浓度为100-150μg/mL，丹酚酸B质量浓度为1.0-2.5mg/mL的混合对照品溶液；

(3)精密吸取供试品溶液1-5μL，注入高效液相色谱仪，采用外标峰面积法，同时测定供试品溶液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量；

其中，色谱条件如下：

色谱柱：HPLC C18柱；

流动相：A相：水，含0.3％～0.6％的甲酸；B相：乙腈，含2％～4％的甲醇和0.3％～0.6％的甲酸；

梯度洗脱：0～40min，20％B；40～50min，20-70％B；

流速：0.9-1.1mL/min；

柱温：30℃-35℃；

检测波长：288nm；

其中，步骤(1)、(2)中所述初始流动相，是指80％A流动相和20％B流动相的混合溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，

色谱柱优选：UPLC C18柱；

流动相优选：

溶剂A：水，含0.2％甲酸；溶剂B：乙腈，含3％甲醇；或

溶剂A：水，含0.1％甲酸；溶剂B：乙腈，含2％甲醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中的质谱条件如下：

四级杆-飞行时间质谱采用(-)-ESI离子源，雾化气为高纯氮气，碰撞气为高纯氦气；

扫描范围：m/z100-1200；

碰撞能量：6eV；

MSE梯度裂解能：20-40eV。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中，

流动相优选：

A相：水，含0.5％的甲酸；B相：乙腈，含2％的甲醇和0.5％的甲酸；或

A相：水，含0.3％的甲酸；B相：乙腈，含3％的甲醇和0.3％的甲酸；

流速优选1mL/min；

柱温优选30℃。