[发明专利]一种丹参多酚酸提取物指纹图谱及有关成分的含量测定方法

说明书

本发明涉及一种丹参多酚酸提取物指纹图谱的建立及有关成分的含量测定方法，包括如下步骤：步骤1：采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化定量指纹图谱；步骤2：利用质谱对步骤1中指纹图谱中的峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰；步骤3：采用高效液相色谱可变波长检测法对步骤2中指认出的三个含量较大、活性比较明显且结构明确的指标性成分含量进行测定。

技术领域：

本发明涉及一种中药提取物的检测方法，特别涉及一种丹参多酚酸提取物指纹图谱的建立及有关成分的含量测定方法

背景技术：

丹参为唇形科鼠尾草属植物。又名：紫丹参、红根、血参、大红袍等。丹参以根供药用，味苦，性微寒。具有活血调经、祛瘀生新、镇静安神、凉血消痈、消肿止痛等功能。用于治疗月经不调、痛经、产后瘀阻腹痛、关节酸痛、神经衰弱失眠、心悸、痈肿疮毒等症。近代医学临床证明，丹参有扩张血管与增进冠状动脉血流量的作用，用来治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、心动过速等症，有显著的疗效；还用来治疗慢性肝炎、早期肝硬变等症，亦有良好的效果。

丹参中含有两类主要有效成分，即脂溶性丹参酮类和水溶性丹参酚酸类。现代医学认为，丹参酚酸类(salvianolie acids)成分，能够缩小心肌梗死的范围，减轻其病情，对大鼠心肌缺血、再灌注损伤具有保护作用，同时有明显的抑制血小板聚集、抗凝、溶纤及降低血脂、抗动脉粥样硬化的作用，具有较大的临床药用价值。该类化合物主要有丹酚酸、丹参素、原儿茶醛、咖啡酸等，其中丹酚酸B是丹参水溶性成分中的主要药效成分。

丹参多酚酸注射剂是一种已经上市的产品，其活性物质被称为“丹参多酚酸”。丹参多酚酸的提取制备方法有多种，例如：取丹参饮片，用纯化水煎煮提取三次，每次0.5～1小时，将三次提取液合并，冷却，用盐酸溶液调节至酸性，放置4～8小时，过滤，得澄明药液，将药液用聚酰胺柱层析工艺纯化，上样后用纯化水冲洗，以碳酸氢钠溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液用盐酸溶液调节至酸性，采用大孔树脂柱层析工艺纯化药液，上样后用纯化水冲洗，以乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩回收乙醇，所得浓缩液冷藏12～24小时后过滤，滤液用氢氧化钠溶液调节pH值至5.3～6.0，冷冻干燥，即得。之后 再将丹参多酚酸提取物与辅料进行混合制备成各种制剂。例如，与甘露醇溶液进行混合，并调pH至5.5～6.0，定容后冷冻干燥，制备丹参多酚酸注射剂。

作为丹参多酚酸注射剂的活性成分，目前丹参多酚酸提取物和制剂的质量标准现状来看，质控项目很不全面，普遍采用紫外-可见分光光度法来测定多酚酸的含量。该法是以丹酚酸B为对照计算多酚酸的含量，专属性和准确度差。且对于成分复杂的中药制剂，仅以一种成分控制含量指标，在缺乏整体性的同时，对于复杂成分的指认也并不充足。

因此，针对上述复杂成分指认不充分以及定量不准确等缺陷。本发明开发了UPLC色谱指纹图谱的方法，利用液质进行峰指认，从而确定了23个紫外检测共有的指纹峰。并且同时对于指认出的三个含量较大、活性比较明显且结构明确的指标性成分建立了HPLC含量测定方法。

本发明是以全面表征中药制剂的质量为目标，提供了一种采用UPLC-PDA法(超高效液相多波长可见紫外检测法)，建立了丹参多酚酸提取物的数字化定量指纹图谱，并以二级系统指纹定量法鉴定了多批丹参多酚酸提取物样品的一致性与稳定性，共检出化学成分39个，结合多级质谱信息及对照品，鉴定丹参酚酸类化合物23个。考虑到UPLC应用到大规模检测的成本及HPLC的广泛应用性，又以HPLC-VWD法(高效液相色谱可变波长检测法)同时测定三个指标性成分迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量。在确保准确性、有效性的同时，又兼顾了成本节约原则，更适合应用于扩大化生产，完善了现有的注射用丹参多酚酸的质控标准。

发明内容：

本发明提供一种丹参多酚酸提取物指纹图谱及含量测定方法，其特征在于，步骤如下：

步骤1：采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化定量指纹图谱；