[发明专利]一种高纯度眼镜蛇神经毒素的提取方法及含有该毒素的药物组合物

权利要求书

1.一种高纯度科博肽的提取方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

1)取眼镜蛇粗毒溶解于蒸馏水或含NaCl的缓冲液中，。室温或低温离心，取上清液，待上柱层析；

2)取上清液，上SP Sepharose FF阳离子柱层析，用NaAC-HAC、Tris-HCl或磷酸盐缓冲液进行直线梯度洗脱，按记录谱图收集科博肽组分，收集液用磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液在低温透析后待上样；

3)将步骤2)收集的科博肽组分溶液，上样CM52Cellulose阳离子柱层析，用含NaCl的磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液进行直线梯度洗脱，按记录谱图收集科博肽组分，收集液用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液低温透析后待上样；

4)将步骤3)收集的科博肽组分溶液，上样DEAE Sepharose FF阴离子柱层析，用磷酸盐或Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，收集记录谱图的最大峰即科博肽组分，收集液用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液低温透析后，把透析液装入阻断分子量为5000的透析袋中，用聚乙二醇8000包埋浓缩待上样；

5)将步骤4)收集的科博肽组分浓缩溶液，上样Sephadex G-50凝胶过滤柱层析，用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液洗脱，收集记录谱图最大峰即科博肽组分，收集液用NaCl溶液低温透析，所得的科博肽组分溶液过滤除菌，在冷冻干燥机中抽真空冻干，得到高纯度的科博肽；

或

所述的高纯度科博肽的提取方法，包括下述步骤：

1)取眼镜蛇粗毒溶解于蒸馏水或含NaCl的缓冲液中，离心，取上清液，待上柱层析；

2)取上清液，上SP Sepharose FF阳离子柱层析，用NaAC-HAC、Tris-HCl或磷酸盐缓冲液进行直线梯度洗脱，按记录谱图收集科博肽组分，收集液用磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液在低温透析后待上样；

3)将步骤2)收集的科博肽组分溶液，上样CM52Cellulose阳离子柱层析，用含NaCl的磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液进行直线梯度洗脱，按记录谱图收集科博肽组分，收集液用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液在低温透析、浓缩后待上样，

4)将步骤3)收集的科博肽组分浓缩溶液，上样Sephadex G-50凝胶过滤柱层析，用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液洗脱，收集记录谱图最大峰即科博肽组分，收集液用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液低温透析后待上样；

5)将步骤4)收集的科博肽组分溶液，上样DEAE Sepharose FF阴离子柱层析，用含NaCl的磷酸盐或Tris-HCl缓冲液进行线性梯度洗脱，收集记录谱图的最大峰即科博肽组分，收集液用NaCl溶液低温透析，所得的科博肽组分溶液过滤除菌，在冷冻干燥机中抽真空冻干，得到高纯度的科博肽。