[发明专利]环介导等温扩增检测Miltenberger血型

权利要求书

1.一种Miltenberger血型Mur抗原的基因检测方法，其特征在于，用于GP.Mur、GP.Bun、GP.HF和GP.Hop的检测，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测，包括步骤为：LAMP引物的设计；血液基因组DNA的提取；LAMP的扩增样品中的目的片段和结果的判定。

2.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，所述LAMP引物的设计是以genbank号为JN201202.2的序列为模板，靶位点的选择在7至191位之间，所述引物的Tm值在60-65℃之间，GC含量在50%-60%之间。

3.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，所述血液基因组DNA的提取方法采用硅基磁珠法、酚氯仿抽提法、盐酸胍法、硅胶柱试剂盒法或全血煮沸法。

4.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，所述LAMP引物的DNA序列为：F3：AGATAAGCACAAACGGGA；B3：GTTTGAGAACTGTCATGAGTT；

FIP：GGAGGGTAAACAGTTCTAACAGATTTTCACATATCCAGCTCATACTGC；BIP：AAGAGGAAACCGGTATGTTCTTAGTTTTTAGCTCGTGTAAATAGAGTTCAA。

5.根据权利要求4所述的基因检测方法，其特征在于，所述F3/B3与FIP/BIP的物质的量浓度比为1：4。

6.根据权利要求4所述的基因检测方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应的过程为：当采用25 μL体系时，F3/B3各10 pmol，BIP/FIP各 40 pmol，5 mmol/L MgSO₄，2.5 μL 缓冲液，1 μL BstDNA聚合酶，50 ng 目标DNA，水补足体积至25 μL，其中2.5 μL 缓冲液包括pH为8.8的20 mM Tris-cl、10 mM KCl、10 mM (NH₄)₂SO₄，0.1% Triton X-100，将上述除BstDNA聚合酶以外的试剂混匀置于PCR管中，95℃5分钟，立即冰浴3分钟，加入1 μL BstDNA，65℃，40 min，80℃，10 min终止反应。

7.根据权利要求1所述的基因检测方法，其特征在于，所述LAMP结果的判定方法采用荧光定量仪、肉眼观察沉淀、浊度法、染料法或琼脂糖凝胶电泳法。