[发明专利]葡萄籽提取物中原花青素的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种葡萄籽提取物中原花青素的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。

背景技术

葡萄籽提取物是从葡萄籽中提取分离得到的一类多酚类物质，主要由原花青素，儿茶素，表儿茶素，没食子酸，表儿茶素没食子酸酯等多酚类物质组成。由于葡萄籽提取物显著的生物活性，如抗氧化性和清除氧自由基等。这些引起了人们研究和开发葡萄籽提取物的兴趣。目前，对葡萄籽提取物中原花青素的测定大多采用Bate-Smith和Porter法。但由于原花青素成分的极其复杂性，还不能提供原花青素的标准品。因此Bate-Smith和Porter法只能测定葡萄籽提取物中原花青素的相对含量，其结果一般用原花青素指数和PVU值来表示，原花青素指数一般在80-100之间。PVU值一般在250-350之间。目前有些生产厂家就用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量，这其实是一种错误的表示方法。

因此，建立一种简便、快速、准确测定葡萄籽提取物中原花青素含量的方法很有必要。

发明内容

本发明旨在提供一种简便、快速、准确的葡萄籽提取物中原花青素的测定方法。

本发明所述的葡萄籽提取物中原花青素的测定方法,包括以下步骤：

(1) 葡萄籽提取物中总多酚的测定：

葡萄籽提取物中总多酚的测定采用Folin-Ciocalteau法进行测定，提取物中总多酚的含量以等同于没食子酸表示。

（2）葡萄籽提取物中单体含量的分析：

葡萄籽提取物中的没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯的含量采用HPLC法测定，并采用Folin-Ciocalteau法进行没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯以没食子酸表示含量的反应系数的测定。

（3）葡萄籽提取物中原花青素的计算：

葡萄籽提取物中原花青素的含量按下列公式计算：葡萄籽提取物中原花青素含量等于葡萄籽提取物中总多酚减去各葡萄籽提取物中单体含量。

即Gpc=Ggse-((Gm1*RFm1)+(Gm2* RFm2)+ (Gm3* RFm3)+ (Gm3* RFm3))

其中：Gpc：原花青素的含量，以每克葡萄籽提取物相当于多少克没食子酸表示；Ggse：按Folin-Ciocalteau法测定的总多酚含量；Gm1、Gm2、Gm3、Gm4：分别表示HPLC法测定的葡萄籽提取物中没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯的含量；RFm1、RFm2、RFm3、RFm4：分别表示没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯的反应系数。

优选的，本发明所述的高效液相色谱仪的色谱条件是：检测波长：280nm；柱温30℃；流动相流速为1.0ml/min；流动相：A，20.0%乙酸；B：80%乙腈；采用梯度洗脱：0min-85min，100%-20%A；6min-85min，4%-80%B，进样量：10μL。

更优选的，本发明所述的以没食子酸表示含量的反应系数的测定方法为准确配制含量为100.00μg/mL的儿茶素、表儿茶素、表儿茶素、没食子酸酯甲醇溶液，按Folin-Ciocalteau法进行反应，反应后的溶液在760nm读取吸光值，吸光值代入以没食子酸为对照品的标准曲线计算其多酚的含量即相当于没食子酸的量表示。由按Folin-Ciocalteau法测得的每种单体的多酚含量除以其真实含量即为反应系数。

本发明所述的检测方法中，由于葡萄籽提取物是由原花青素和几种单体组成的，因此葡萄籽提取物中原花青素的含量可由葡萄籽提取物中总多酚的含量减出其中单体的含量求得。葡萄籽提取物中总多酚的含量可以采用Folin-Ciocalteau法测定，单体的含量采用高效液相HPLC测定。

本发明所述的测定方法具有简单快速、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠等特点。因此，本发明所述的测定方法可用于葡萄籽提取物中原花青素的快速常规分析测定。

具体实施方式

实施例一：

（1）葡萄籽提取物中多酚的含量：

采用Folin-Ciocalteau法进行测定，测定试样（由深圳邦乐生物技术有限公司生产）葡萄籽提取物多酚含量为91.2%（按绝对干重计算）。

（2）葡萄籽提取物中单体的含量

葡萄籽提取物中的没食子酸，儿茶素，表儿茶素，表儿茶素没食子酸酯的含量采用HPLC法测定，测定结果如下：