[发明专利]一种单层荧光纳米二硫化钼的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及的是一种简单“绿色”的方法制备单层荧光纳米二硫化钼。

背景技术

近年来，随着microRNA(miRNA)在生物体中所起的重要调控作用逐渐地引起广大研究者的兴趣，对miRNA在细胞内的分析检测要求也越来越高。常见病毒载体对人体有一定的危害，而大多数非病毒载体转载量少，且缺少靶细胞定向能力。以无机非金属纳米材料为载体，与其它基因载体相比较在靶向运输和细胞毒性上具有较大的优势因而受到各研究领域的广泛关注。

介孔二氧化硅载体作为现今研究比较热门的纳米材料，各种不同的方法探索合成均匀性好，纯度高，成本低，方法简单的介孔二氧化硅。介孔二氧化硅由于其球体上大量的介孔存在，比表面积增加，大大增加了其负载量。而这种纳米材料主要有二氧化硅组成，其对生物体的毒性大大降低，在药物控制释放等领域得到了大量的应用。

虽然介孔二氧化硅载体具有诸多优点，但是仍然存在一些待解决的问题限制了其在实际中的应用。介孔二氧化硅载体在转载药物和基因时，需用封堵剂封堵介孔，这增加了实验步骤，且封堵剂有时对生物体也是有害的。类石墨烯纳米材料，由于其极高的比表面积，有报道称其负载量高达400％，与传统的脂质体和介孔二氧化硅载体负载量的4倍多。

本发明旨在制备一种多功能基因运输载体。采用液相超声法制备的单层荧光纳米二硫化钼作为类石墨烯纳米材料中新的一员，其自身的荧光，可以在细胞中定位，较小的尺寸对细胞的毒性也几乎可以不计，高的负载量以提高运输效率，是一种较好的基因载体，在生物医药领域能得到广泛的引用。

发明内容

本发明的目的在于克服现如今应用的基因载体的缺陷，发明了一种具有准零维结构的单层荧光纳米二硫化钼载体，其细胞毒性小，负载量高，自身在细胞中定位，可以用于细胞成像，细胞内miRNA检测时的多功能基因载体。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种单层荧光纳米二硫化钼材料，其特征在于以微米级别的二硫化钼粉末为原料，液相超声法得到荧光纳米二硫化钼，粒径大小为30-40nm，荧光发射峰在450-550nm范围内，其中最大荧光发射峰在470nm处。

本发明方法具体步骤为：

a.将二硫化钼粉末溶解到溶剂中，配成1-10mg/mL的悬浊液A；

b.在步骤a所得的悬浊液A中加入适量氢氧化钠，使氢氧化钠的浓度为1mg/mL，得到悬浊液B；

c.将步骤b所得的悬浊液B在超声破碎仪(功率大于100W)中超声10小时以上，得到悬浊液C；

d.将步骤c制得的悬浊液C离心取上清，放入真空干燥箱中干燥，得到粉末；

e.将一定体积的去离子水加入步骤d所得的粉末中，配成1mg/mL溶液，超声辅助溶解，用0.22μm的过滤膜过滤得到溶液；

f.用分子量为1000的透析袋去透析步骤e所得的溶液，去除杂质小分子，最终得到荧光纳米二硫化钼材料。

根据权利要求2所述的荧光纳米二硫化钼材料的制备方法，其特征在于步骤a中的溶剂最好为N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)。

其中步骤c中超声时间最好为20小时。

为了测试所制备多功能材料作为基因载体的实用性，本发明将单层荧光纳米二硫化钼载体以不同的浓度与HeLa细胞温浴，并用浓度为100μg/mL的载体与带有荧光集团标记的DNA共同孵育后，转染进入HeLa细胞，最后用激光共聚焦显微镜观察转染之后的细胞。本发明所制备纳米二硫化钼载体在浓度高达200μg/mL时，细胞存活率仍然在90％以上，而激光共聚焦显微镜观察到的图像显示出载体与DNA在细胞中存在于不同的地方。

同其他的无机非金属纳米载体相比，我们制备的基因载体具备以下的特点，本发明制备方法的特点在于：

(1)制备工艺简单，二硫化钼载体通过一步法制得，制备周期短，效率高；合成过程不产生任何对环境有害的物质。

(2)应用这种简单的方法制备的单层荧光纳米二硫化钼单层率高，量子差率高，均一性好。

(3)应用这种简单的方法制备的单层荧光纳米二硫化钼应用于细胞成像和细胞内miRNA分析时，细胞毒性小，负载量大。

附图说明

图1NMP为溶剂超声剥离制备单层荧光纳米二硫化钼TEM图片。

图2NMP为溶剂超声剥离制备单层荧光纳米二硫化钼AFM图片。

图3NMP为溶剂超声剥离制备单层荧光纳米二硫化钼荧光图谱。