[发明专利]纳米羟基磷灰石‑基因‑药物复合物及制备方法和应用

权利要求书

1.纳米羟基磷灰石-基因-药物复合物，其特征在于所述复合物由纳米羟基磷灰石、抗肿瘤基因、抗肿瘤药物组成，所述纳米羟基磷灰石尺寸为20-300nm，纳米羟基磷灰石表层由聚乙烯亚胺覆盖，所述纳米羟基磷灰石表层的聚乙烯亚胺为分枝状，其分子量为8900-120000Da，

所述基因为抗肿瘤基因，所述药物为抗肿瘤药物；

该纳米羟基磷灰石-基因-药物复合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1）将钙盐溶液于0-4℃冷却，逐滴加入等体积磷酸盐溶液，并维持100-300rpm/min搅拌，待滴加完成后，持续搅拌0.5-5h；钙盐溶液终浓度为1-10mmol/L，磷酸盐溶液终浓度为0.5-7mmol/L；

2）在步骤1）反应体系中缓慢滴加碳酸氢钠溶液，持续搅拌0.5-5h，其中，碳酸氢钠溶液的滴加量为步骤1）中钙盐溶液体积的0.004-0.01倍；碳酸氢钠溶液终浓度为0.2-1.2mmol/L；

3）用氨水缓慢调节反应体系的pH值至10-13，调节完成后持续搅拌0.5-5h；

4）缓慢滴加与步骤2）中碳酸氢钠溶液等体积的聚乙二醇-400溶液，持续搅拌0.5-5h；

5）将步骤4）反应体系升温至90℃，持续搅拌0.5-5h；

6）停止加热，待反应体系降温至室温后，分别用去离子水和无水乙醇以离心方式各洗涤沉淀2-3次；

7）用去离子水重悬步骤6）得到的沉淀，加入聚乙烯亚胺溶液涡旋震荡混匀，得到HAp-PEI混合液，室温静置0.5-5h，其中，聚乙烯亚胺溶液的加入量为步骤1）中钙盐溶液体积的0.1-0.5倍；加入的聚乙烯亚胺溶液浓度为0.1-5mg/ml；

8）以离心方式离心步骤7）得到的混合液，再以去离子水重悬，得到被PEI包被的纳米羟基磷灰石悬液；

9）将步骤8）得到的纳米羟基磷灰石悬液与抗肿瘤基因按质量分数比20:1-16的比例混合形成纳米羟基磷灰石-基因前体复合物，然后将该前体复合物于室温静置3-30min；

10）将步骤9）得到的纳米羟基磷灰石-基因前体复合物与抗肿瘤药物按质量分数比26:1-10进行混合，并轻轻混合均匀，室温静置3-30min；

11）将步骤10）得到的混合物以离心方式除去游离的抗肿瘤基因和药物，再以去离子水重悬，即得到纳米羟基磷灰石-基因-药物复合物；

所述抗肿瘤基因为野生型p53基因、Rb基因、p16基因、APC基因、MCC基因、DCC基因、MTS基因、PTEN基因中的任一种或几种；

所述抗肿瘤药物为阿霉素、紫杉醇、顺铂、吉西他滨、氟尿嘧啶、盖诺、表阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、博莱霉素、多帕菲或它们的衍生物中的任何一种或几种。