[发明专利]一种液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法及含量测定方法

权利要求书

1.一种液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法，其特征在于，包括：

a、取25克液态乳，加入碱性蛋白酶0.03至0.1U和中性蛋白酶0.01至0.05U，充分振荡混合后于40至60℃水浴加热2至4小时，得到水解液；

b、将所述水解液振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离心15至20分钟，去掉上清液，保留沉淀物及上层脂肪；

c、向所述步骤b得到的所述沉淀物和所述上层脂肪中加入60至100℃的去离子水15至30mL，振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离心15至20分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀；以及

d、将所述步骤c中得到的所述沉淀用水清洗一至两次，得到提取物；所述用水清洗的方法为：加入60至100℃的去离子水15至30mL，振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离心15至20分钟，去掉上清液，保留沉淀。

2.如权利要求1所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法，其中，还包括将所述步骤d得到的所述提取物冷冻干燥。

3.一种液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其特征在于，包括先通过权利要求1所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法，提取待测液态乳中的酵母β-葡聚糖，再测定提取产物中酵母β-葡聚糖的含量。

4.如权利要求3所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其中，包括：

通过权利要求1所述的提取方法，提取待测液态乳中的酵母β-葡聚糖；

将所述提取后得到的产物用溶壁酶、1，6-葡聚糖酶、外切-β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶水解，使酵母β-葡聚糖全部水解成葡萄糖，得到待测液；以及

测定所述待测液中葡萄糖的含量，并计算所述待测液态乳中酵母β-葡聚糖的含量。

5.如权利要求4所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其中，测定所述待测液中葡萄糖的含量的方法为GOPOD法。

6.如权利要求5所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其中，所述GOPOD法的步骤包括：向所述待测液中加入3 mL GOPOD 溶液，40℃水浴中保持20分钟；最后冷却至室温并在510nm下测定吸光度值。

7.如权利要求4所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其中，测定所述待测液中葡萄糖的含量的方法为高效液相色谱法。

8.如权利要求7所述的液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其中，所述高效液相色谱法的条件为：

色谱柱：Dionex CarboPac PA10 4×250 mm，带 CarboPac PA10 4×50 mm 保护柱；

流动相：A为超纯水，电阻率≥18.2MΩ；B为0.25 mol/L 氢氧化钠溶液；C为1 mol/L 乙酸钠溶液；

检测器：安培检测器；Au 工作电极；Ag/AgCl 参比电极；检测池温度30℃；糖采用积分安培模式检测，波形选择碳水化合物标准四电位；

流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：25 μL；

淋洗梯度见下表：

时间，min流速，mL/minOH 浓度，mmol/L乙酸钠浓度，mol/L梯度曲线0.001.0150线性16.001.0150线性16.101.01000.6线性21.001.01000.6线性21.101.02000线性23.001.02000线性23.101.0150线性30.001.0150线性

安培检测器检测糖波形参数：

时间，s电压，V集成0.0000.100off0.2000.100on0.4000.100off0.410-2.000off0.420-2.000off0.4300.600off0.440-0.100off0.500-0.100off， LastStep on

。