[发明专利]一种液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法及含量测定方法

说明书

本发明提供了一种液态乳中酵母β‑葡聚糖的提取方法，包括：a、取25克液态乳，加入碱性蛋白酶0.03‑0.1U和中性蛋白酶0.01‑0.05U，混合后于40‑60℃水浴加热2‑4小时，得到水解液；b、混匀后于5000‑6000转/分钟离心15‑20分钟，去掉上清液，保留沉淀物及上层脂肪；c、向沉淀物和上层脂肪中加入去离子水15‑30mL，混匀后于5000‑6000转/分钟离心15‑20分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀；d、将沉淀用水清洗一至两次，得到提取物。该提取方法有效降低提取过程中β‑葡聚糖的损失；去除了干扰测定的乳糖。本发明还提供了使用该提取方法的液态乳中酵母β‑葡聚糖的测定方法。

技术领域

本发明涉及一种食品中酵母β-葡聚糖的提取方法及含量测定方法，尤其适用于液态乳中酵母β-葡聚糖的提取和测定。

背景技术

酵母β-葡聚糖是以酿酒酵母为原料，经提取、酸碱处理、喷雾干燥等步骤生产而成，分子量为2万至400万道尔顿，分子式为(C6H12O6)n，其中n=125-25000。大量研究证明，酵母β-葡聚糖具有增强免疫、抗辐射与降血脂功能，这使得酵母β-葡聚糖在食品行业有了更为广泛的应用前景。

目前，酵母β-葡聚糖的测定方法多采用苯酚-硫酸法，但该法精密度较差，并且不适合测定液态乳制品中的酵母β-葡聚糖。液态乳制品的成分比较复杂，且含有大量蛋白质，直接测定的结果准确性较差并可对仪器造成不良影响。较为理想的方案是先提取液态乳中的酵母β-葡聚糖，再对酵母β-葡聚糖的含量进行测定。现有的提取方法是用蛋白沉淀剂（例如乙酸锌和亚铁氰化钾）将液态乳中的蛋白质沉淀，取上清液进行测定；该方法的缺点是：易造成β-葡聚糖的回收率低；此外，盐析沉淀蛋白方法中，乳糖和其他多糖添加剂对离子色谱测定有干扰，影响β-葡聚糖的测定。

发明内容

本发明的目的是提供一种液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法，可降低提取过程中酵母β-葡聚糖的损失。

本发明的另一个目的是提供一种液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，其回收率和精密度较高。

本发明提供了一种液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法，包括：a、取25克液态乳，加入碱性蛋白酶0.03至0.1U和中性蛋白酶0.01至0.05U，充分振荡混合后于40至60℃水浴加热2至4小时，得到水解液；b、将水解液振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离心15至20分钟，去掉上清液，保留沉淀物及上层脂肪；c、向步骤b得到的沉淀物和上层脂肪中加入60至100℃的去离子水15至30mL，振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离心15至20分钟，去掉上清液及上层脂肪，保留沉淀；以及d、将步骤c中得到的沉淀用水清洗一至两次，得到提取物；用水清洗的方法为：加入60至100℃的去离子水15至30mL，振荡混合均匀后，于5000至6000转/分钟离心15至20分钟，去掉上清液，保留沉淀。

在液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法的一种示意性实施方式中，还包括将步骤d得到的提取物冷冻干燥。

本发明还提供了一种液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法，包括先通过上述的液态乳中酵母β-葡聚糖的提取方法，提取待测液态乳中的酵母β-葡聚糖，再测定提取产物中酵母β-葡聚糖的含量。

在液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，测定方法包括：通过上述的提取方法，提取待测液态乳中的酵母β-葡聚糖；将提取后得到的产物用溶壁酶、1，6-葡聚糖酶、外切-β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶水解，使酵母β-葡聚糖全部水解成葡萄糖，得到待测液；以及测定待测液中葡萄糖的含量，并计算待测液态乳中酵母β-葡聚糖的含量。

在液态乳中酵母β-葡聚糖的含量测定方法的一种示意性实施方式中，测定待测液中葡萄糖的含量的方法为GOPOD法。