[发明专利]一种菌丝生长活性测定方法

权利要求书

1.一种菌丝生长活性测定方法，其特征在于包括以下步骤：

取一定量母液于PDA培养基中，充分混合，将混合好的培养基均匀倒入培养皿内冷凝即成带毒培养基；待培养基冷却凝固后，用接种针或消毒的镊子将制备好的菌饼反面移植到带毒培养基上；设阴性对照、空白对照和阳性对照；

液体悬浮培养在活性测定之前确定供试病原真菌在液体悬浮培养中的最佳收获期，挑取新鲜菌丝于无菌马铃薯-葡萄糖-液体培养基中，同时含有相应的有机溶剂，摇床培养，，采用过滤法收集菌丝，烘干至恒重，求其平均值，在此基础上绘制菌丝生长曲线，将供试样品用合适的溶剂配成系列浓度的母液，然后取一定量于真菌培养液中；

用接种针将制备好的菌饼挑到混合好的带毒PDB培养液中；然后摇床培养，待菌丝生长到最佳收获期时，采用过滤法收集菌丝，烘干菌丝至恒重；实验设阴性对照、空白对照和阳性对照。

2.根据权利要求1所述一种菌丝生长活性测定方法，其特征在于所述取一定量母液于PDA培养基中，充分混合，化合物在培养液中的浓度分别为：256μg/mL、128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL和8μg/mL；将混合好的培养基均匀倒入培养皿内冷凝即成带毒培养基；待培养基冷却凝固后，用接种针或消毒的镊子将制备好的菌饼反面移植到带毒培养基上，1个培养皿中央接1个菌饼；设阴性对照、空白对照和阳性对照，每个处理重复3次。

3.根据权利要求2所述一种菌丝生长活性测定方法，其特征在于所述液体悬浮培养在活性测定之前确定3种供试病原真菌在液体悬浮培养中的最佳收获期，挑取新鲜菌丝于无菌马铃薯-葡萄糖-液体培养基中，同时含有相应的1%的有机溶剂，摇床培养5-8天，每天取出3瓶，采用过滤法收集菌丝，于60°C下烘干至恒重，求其平均值，在此基础上绘制菌丝生长曲线，将供试样品用合适的溶剂配成系列浓度的母液：2.0mg/mL、1.5mg/mL、1.0mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL和0.0625mg/mL，然后取一定量于真菌培养液中，在培养液中的浓度分别为：20μg/mL、15μg/mL、10μg/mL、5.0μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL；

用接种针将制备好的菌饼挑到混合好的带毒PDB培养液中，1个三角瓶中接种1个菌饼；然后摇床培养，待菌丝生长到最佳收获期时，采用过滤法收集菌丝，于60°C下烘干菌丝至恒重；实验设阴性对照、空白对照和阳性对照，每个处理重复3次。