[发明专利]一种Rv2645蛋白的制备及其在结核诊断与重组BCG疫苗中的应用在审
| 申请号： | 201410582674.7 | 申请日： | 2014-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN104292315A | 公开（公告）日： | 2015-01-21 |
| 发明（设计）人： | 章晓联;罗微;屈子璐 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C07K14/35 | 分类号： | C07K14/35;C12N15/31;C12N15/70;G01N33/569;A61K39/04;A61P31/06 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 rv2645 蛋白 制备 及其 结核 诊断 重组 bcg 疫苗 中的 应用 | ||
1.结核分枝杆菌Rv2645蛋白作为结核分枝杆菌优势抗原的应用，其特征在于：所述的Rv2645蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.结核分枝杆菌Rv2645蛋白的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）以结核分枝杆菌的基因组为模板，使用下述引物扩增Rv2645基因；
上游引物：5'-ATTGGATCCATGACCACCACGC-3'，
下游引物：5'-AATAAGCTTCCGCCGGTGTTCGC-3'；
（2）将Rv2645基因通过限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ构建到原核表达载体pET28a上得到重组质粒pET28a-Rv2645；
（3）再将pET28a-Rv2645转化到大肠杆菌BL21中，通过IPTG诱导和Ni-NTA亲和纯化得到Rv2645蛋白。
3.结核分枝杆菌Rv2645蛋白在制备结核病T-SPOT的新型诊断试剂中的应用。
4.一种结核病T-SPOT的新型诊断试剂，其特征在于：将按权利要求2所述的方法制备的Rv2645蛋白去内毒素得到。
5.结核分枝杆菌Rv2645蛋白在制备结核病特异IgG4抗体的新型诊断试剂中的应用。
6.Rv2645蛋白作为结核分枝杆菌的优势抗原在结核病新型重组BCG疫苗或蛋白疫苗中的应用。
7.一种结核病蛋白疫苗，其特征在于：为按权利要求2所述的方法制备的Rv2645蛋白。
8.一种结核病新型重组BCG疫苗，其特征在于：为能表达结核分枝杆菌Rv2645蛋白的重组BCG。
9.根据权利要求8所述的结核病新型重组BCG疫苗，其特征在于通过包含如下步骤的方法制备得到：
（1）以结核分枝杆菌的基因组为模板，使用下述引物扩增Rv2645基因；
上游引物：5'-ATTGAATTCATGACCACCACGC-3'，
下游引物：5'-AATAAGCTTCCGCCGGTGTTCGC-3'；
（2）将Rv2645基因通过限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ构建到穿梭质粒pMV361中得到重组质粒pMV361-Rv2645；
（3）再将pMV361-Rv2645电转到BCG中得到能表达Rv2645蛋白的重组BCG。
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