[发明专利]一种利用静息乳酸菌技术转化菜油脚料生产共轭亚油酸的方法

权利要求书

1.一种利用静息乳酸菌技术转化菜油脚料生产共轭亚油酸的方法，其特征是包括如下步骤：

（1）提取油脂：称取菜油脚料到烧杯中，放在水浴锅中60-90℃搅拌加热20-40 min，期间加入少量微沸蒸馏水；将热处理后的菜油脚料4000-6000 rpm离心10-30 min，倾出上层油，得中性油脂；

（2）乳化：将步骤（1）得到的中性油脂与Tween 80按照1:0.8-1.7比例混合，加入适量的蒸馏水，进行超声波乳化处理：500 W、超声10 s、间歇5 s、作用10-20次，110-121℃灭菌20-30 min，得油脂乳化液；

（3）酶解：取步骤（2）的油脂乳化液放入锥形瓶中，加入pH值7.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，添加黑曲霉脂肪酶粉至终浓度为150-270 U/mL，40-45℃，120-150 rpm酶解30-50 min，得油脂酶解液；

（4）制备静息乳酸菌：从新鲜斜面培养基上挑取乳酸菌，接种到MRS培养基中，37℃厌氧培养20-26 h，得种子液；将种子液按3%-5%的接种量接种至添加有亚油酸乳化液的MRS培养基中进行诱导增殖培养，37℃静置培养20 h；培养液4℃，4000-6000 rpm离心15-30 min，去除上清液，底部菌体用无菌生理盐水洗涤2-3次，离心收集，得静息乳酸菌菌悬液；

（5）静息乳酸菌转化菜油脚料提取油脂酶解液生成共轭亚油酸：取步骤（3）的油脂酶解液放入反应管，加入步骤（4）的静息乳酸菌菌悬液，加入适量0.1 mol/L的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，使得提取油脂终浓度为70-80 mg/mL，32-36℃，90-110 rpm转化22-26 h，得共轭亚油酸转化液；

（6）共轭亚油酸的提取：取步骤（5）的共轭亚油酸转化液与正己烷按1:2-5的比例混合，快速混匀4-6 min，3800 -5000 rpm离心4-6min，分为三层（脂相、乳化层和水相），去除最下层水相，然后加入适量蒸馏水，混匀4-6 min，洗涤水溶性物质，离心分层去除下层水相，将脂相层通过无水硫酸钠过滤，旋转蒸发去除正己烷即得到共轭亚油酸。