[发明专利]一种促肝细胞生长素的制备方法在审
| 申请号： | 201410586429.3 | 申请日： | 2014-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN104388511A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 王康林;马婕;陈玉海;苟希霞 | 申请（专利权）人： | 合肥平光制药有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/34 |
| 代理公司： | 合肥市长远专利代理事务所(普通合伙) 34119 | 代理人： | 程笃庆;黄乐瑜 |
| 地址： | 231131 安徽省合肥*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肝细胞 生长素 制备 方法 | ||
1.一种促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、乳猪肝预处理：取乳猪肝，去除胆囊、筋膜和结缔组织，清水洗净，沥水后再用注射用水清洗，然后切成宽度为3-5cm的小块或细条状，再置于绞肉机中绞成粒径为1-3mm的乳猪肝颗粒；
S2、均质：将S1得到的乳猪肝颗粒加入胶体磨中以2800-3000rpm的转速研磨2.5-4.5min得到乳猪肝糜，将乳猪肝糜和注射用水按重量比为1-2:1-2加入搅拌机中，以280-300rpm的转速搅拌15-18min得到乳猪肝匀浆；
S3、酶解：将S2得到的乳猪肝匀浆置于反应容器中，滴加3-5mol/L盐酸溶液至pH值为2.5-3.0，再加入胃蛋白酶以150-180rpm的转速搅拌22-25min后，将反应容器及其内容物置于37-45℃的水浴锅中水解6-8h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为99-101:0.4-0.6；
S4、灭活：将S3得到的酶解物料水浴加热至81-82℃，保温10-13min后，将温度降至室温静置得到灭活匀浆；
S5、离心：将S4得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以3700-4200rpm的转速离心13-17min后，将上清液取出滴加3-5mol/L氢氧化钠溶液至pH为6.8-7.2得到中性离心液；
S6、粗滤：将S5得到的中性离心液经过截留分子量为100KD的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再经过截留分子量为10KD的中空纤维超滤装置进行第二次过滤得到粗滤液，其中第一次过滤和第二次过滤的回流压力为0.05-0.10MPa；
S7、超滤：将S6得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.15-0.20MPa，回流压力为0.05-0.10MPa。
2.根据权利要求1所述促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S2中，将S1得到的乳猪肝颗粒加入胶体磨中以2850-2900rpm的转速研磨3-4min得到乳猪肝糜，将乳猪肝糜和注射用水按重量比为1-1.2:1-1.2加入搅拌机中，以290-300rpm的转速搅拌16-17min得到乳猪肝匀浆。
3.根据权利要求1或2所述促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S3中，将S2得到的乳猪肝匀浆置于反应容器中，滴加4-5mol/L盐酸溶液至pH值为2.7-3.0，再加入胃蛋白酶以160-180rpm的转速搅拌23-25min后，将反应容器及其内容物置于40-42℃的水浴锅中水解6.5-7.5h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为99-101:0.5。
4.根据权利要求1-3任一项所述促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S5中，将S4得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以3900-4100rpm的转速离心14-16min后，将上清液取出滴加4-5mol/L氢氧化钠溶液至pH为6.9-7.1得到中性离心液。
5.根据权利要求1-4任一项所述促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，S7中，将S6得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.17-0.18MPa，回流压力为0.06-0.09MPa。
6.根据权利要求1-5任一项所述促肝细胞生长素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、乳猪肝预处理：取乳猪肝，去除胆囊、筋膜和结缔组织，清水洗净，沥水后再用注射用水清洗，然后切成宽度为3-5cm的小块或细条状，再置于绞肉机中绞成粒径为1-3mm的乳猪肝颗粒；
S2、均质：将S1得到的乳猪肝颗粒加入胶体磨中以2900rpm的转速研磨3min得到乳猪肝糜，将乳猪肝糜和注射用水按重量比为1:1加入搅拌机中，以 300rpm的转速搅拌16.5min得到乳猪肝匀浆；
S3、酶解：将S2得到的乳猪肝匀浆置于反应容器中，滴加5mol/L盐酸溶液至pH值为3.0，再加入胃蛋白酶以170rpm的转速搅拌24min后，将反应容器及其内容物置于41℃的水浴锅中水解7h得到酶解物料，其中乳猪肝匀浆与胃蛋白酶的重量比为200:1；
S4、灭活：将S3得到的酶解物料水浴加热至82℃，保温10min后，将温度降至室温静置得到灭活匀浆；
S5、离心：将S4得到的灭活匀浆加入离心瓶中，以4000rpm的转速离心15min后，将上清液取出滴加5mol/L氢氧化钠溶液至pH为7.0得到中性离心液；
S6、粗滤：将S5得到的中性离心液经过截留分子量为100KD的中空纤维超滤装置进行第一次过滤后，再经过截留分子量为10KD的中空纤维超滤装置进行第二次过滤得到粗滤液，其中第一次过滤和第二次过滤的回流压力为0.07MPa；
S7、超滤：将S6得到的粗滤液再经截流分子量为6000D的超滤膜进行超滤得到促肝细胞生长素溶液，其中进液压力为0.17MPa，回流压力为0.07MPa。
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