[发明专利]心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的对心型脂肪酸结合蛋白进行定量分析的心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及检测方法。 

背景技术

人心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)是心脏中富含的一种新型小胞质蛋白，它具有高度心脏特异性，主要分布于心肌组织中，约占心肌细胞可溶性蛋白的4%-8%，在骨骼肌、肾小管、脑组织、乳腺、胎盘组织中也有少量分布。它由132 个氨基酸组成，分子量为15KDa，其基因定位于1号染色体。生理条件下，血液中不含HFABP或者含量非常低，性别、年龄和昼夜节律都可以引起HFABP含量的变化，比如男性肌肉比例高于女性，因此男性血液中HFABP浓度高于女性，但总体来说，在正常情况下，HFABP在血液中的表达量极低。在心肌缺血损伤出现后，hFABP 在血液中的含量会迅速升高，在胸痛发作后1-3 小时就出现于血液中，6-8 小时达到峰值，而且血浆水平在24-30小时内恢复正常。 

近年来，对于心肌损伤的生物标志物的研究取得很大进展，包括肌红蛋白（MYO）、心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白I和肌酸激酶同功酶（CKMB）等心肌标志物在临床工作中应用也十分广泛。与这些常用心脏标志物于心肌损伤后出现在血液中的时间和浓度变化对比发现，在心肌损伤早期(6小时内)，较其它心脏标志物而言，HFABP 和MYO 在诊断评估方面具有明显的时间优势。但是，因在炎症、局部缺血、SLE、休克及皮肌炎等情况下亦会引起MYO 的血液浓度升高，因此MYO作为心肌细胞损伤的诊断指标具有特异性较低的特点。而HFABP 相对于MYO 具有着高℃的心肌特异性，所以作为心肌损伤的早期标志物而言，选择HFABP 更为理想。因此HFABP可以作为一种对心肌损伤的早期诊断非常有用的生物标志物。 

目前，针对心型脂肪酸结合蛋白检测方法主要有定量方法和定性检测方法，定量检测方法有双抗夹心法(ELISA)、免疫发光法、高效液相色谱分析、放射免疫分析法，胶乳颗粒增强免疫比浊法等。定性方法主要有免疫层析法。其中，高效液相色谱分析费时且不易自动化；ELISA法定量准确性差、操作时间长、自动化程℃低，多用于定性检测；放射免疫分析法灵敏℃可达到4pg/ml，能检测正常人血清心型脂肪酸结合蛋白，比双抗夹心法灵敏，缺点是所需时间较长，检测结果不稳定，重复性比ELISA差，且存在放射性污染危险；胶乳颗粒增强免疫比浊法(PETIA)可以很方便的应用与全自动生化仪，但是耗时较长，对于急诊科和基层医院，无法满足快速检测的目的；金标方法灵敏℃较低，一般只能定性，不能定量，特别是重复性差这一缺点限制了其在临床上的应用，尤其不适用于需通过准确定量来帮助对疾病进行诊断的体液标志蛋白的定量检测；免疫发光法方法特异性强，敏感性高，但需要昂贵的仪器设备和经验丰富的操作人员，一般多在特定医疗机构使用。因此开发灵敏度更高、快捷方便的心型脂肪酸结合蛋白产品，仍是临床诊断产品研究领域亟需解决的重要问题。 

发明内容

本发明针对现有技术中存在的缺点和不足，提出了一种利用荧光免疫层析的灵敏性，结合荧光免疫层析分析仪实现的灵敏度高、快捷简便，可以准确定量的心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及检测方法。 

本发明可以通过以下措施达到： 

一种心型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，设有试纸卡，其特征在于所述试纸卡设有由下自上依次设有：PVC板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中结合垫上吸附有稀土荧光微球标记的心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体，所述稀土荧光微球的直径为50-120nm，稀土荧光微球掺杂稀土镧系元素，在基态下稳定，在340-380nm的激发光源作用下发射出波长范围在540-600nm的荧光；所述单克隆抗体为纯化后混合的单克隆抗体，来源于针对2-6个不同的心型脂肪酸结合蛋白抗原表位的单克隆抗体细胞株。

本发明所述结合垫的稀土荧光微球的直径优选是60-90nm；所述稀土荧光微球优选掺杂有稀土镧系元素，为铕(Eu) 、钐( Sm) 、铒(Er) 、钕(Nd)等镧系元素的任意一种或几种的混合物；所述稀土荧光微球优选掺杂稀土络合物；结合垫上稀土荧光微球标记的抗体优选来源于针对3个不同抗原表位的单克隆细胞细胞株。