[发明专利]一种采用微流控芯片分析血清脂蛋白亚型精细亚组分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，尤其涉及一种采用微流控芯片分析血清脂蛋白亚型精细亚组分的方法。

背景技术

微流芯片技术，通常称为芯片上实验室，是指在芯片上很小的体积内能进行迅速复杂生物样品分析。一个芯片上实验室系统通常整合自动化和数字化定量和定性多种生物化学分析于一个容易使用的仪器工作平台之内。结合有机合成和生物化学技术，微流芯片仪器现开始集成电子，光学和物理测量与微流体特征一起组成新的基于芯片功能的技术系统。微流芯片技术的优点包括快速，敏感，准确，节省试剂，可自动化和容易操作等。微流芯片技术发展正促使超敏感临床医学快速分子诊断的形成和应用。

大量研究一致认为异常油脂新陈代谢对冠状动脉病 （冠心病）的发病原理有重要作用，例如过高的低密度脂蛋白（LDL）和甘油三酯（TG)血清水平以及低的高密度脂蛋白（HDL) 血清水平， 都预示有高的心血管疾病发病风险；尽管这些脂蛋白在冠心病发病中的重要性， 但在个体之中，影向心血管事件和冠心病程度有很大的不同，例如， 尽管总高密度脂蛋白和总低密度脂蛋白水平都正常，患者仍然发作心脏病。实际上， 超过一半冠心病突发病人（譬如心肌梗塞）或者不稳定的心胶痛病人，他们的总胆固醇（总低密度脂蛋白和总高密度脂蛋白）都在正常范围，这说明仅测量总胆固醇（总低密度脂蛋白总高密度脂蛋白）并不能准确估计心血管疾病的风险。

这些可变性也许一部分可归结于这些脂蛋白的高度功能复杂性和非均匀性。血清脂蛋白主要有三个亚型（classes)：高密度脂蛋白（HDL)、LDL（低密度脂蛋白)以及VLDL（非常低密度 脂蛋白)， 而每个脂蛋白亚型，通过适当的分离手段，可以进一步分成它的亚组分（sub-fractions)，这些脂蛋白亚型的主要不同在于它们的微粒直径、密度以及油脂构成；因而，每个脂蛋白亚型可能致动脉粥样硬化程度亦不同，例如高密度脂蛋白被认为是好的胆固醇，它通过在血管壁逆转运胆固醇，抑制炎症和抗生物氧化反应起保护心脏作用，但是HDL 包含几种亚组分， 即颗粒较大和轻的HDL2以及颗粒较小的HDL3；累积证据显示颗粒较大的HDL2 提供主要的防护作用，颗粒小的 HDL3 具体功能依然不完全明了，但有资料显示过高的HDL3可能对心血管疾病有害；同样的，LDL（低密度脂蛋白) 在超速离心处理和梯度胶凝电泳法中可辨认出至少有五种颗粒亚组分和至少有二种LDL 表现型：表现型A， 主要由大而轻的 LDL颗粒组成 （颗粒大于25.5 nm)； 表现型B， 为小而密集的LDL微粒（颗粒小于25.5 nm) 组成；但只有 LDL 表现型B与增加心血管疾病发病率密切相关。

因此，对脂蛋白亚组分进行精细分析并进一步分离高密度脂蛋白（HDL) 和低密度脂蛋白 （LDL) 能提供更可靠和准确的心血管疾病的预测、诊断以及治疗。

分离血脂蛋白亚类作为心血管疾病的研究已进行几十年，几种常用方法包括密度梯度高速离心分析法（Analytical and Density Gradient Ultracentrifugation， ADGUC)、梯度胶凝电泳分析法（Gradient Gel Electrophoresis， GGE)、 管胶凝体电泳法（Tube Gel Electrophoresis， TGE)、核磁共振光谱分析法 （核磁共振)、高性能液相色谱分析法（HPLC)以及垂直自动分离法（Vertical Auto Profile， VAP)。

梯度胶凝电泳分析法（GGE) 已被临床实验室应用于分离HDL亚型和LDL 亚型近三十年；根据GGE分析，HDL 至少可被分成5个亚型，即HDL2a 、HDL2b 和HDL3a， HDL3b 和HDL3c，其中，HDL2b 是最大的HDL亚型。据信HDL2b水平与患者的临床后果有密切相关， 但其它HDL亚型的临床意义仍是未知的。

同样的，LDL（低密度脂蛋白) 也可以用GGE方法定亚型，至少有二种LDL 表现型：表现型A， 主要由大而轻的LDL颗粒组成 （颗粒大于25.5 nm) ；表现型B， 为小而密集的LDL微粒 （颗粒小于25.5 nm) 组成， LDL 表现型B与增加心血管疾病发病率密切相关。