[发明专利]用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗

说明书

技术领域

   本发明属于生物技术领域的组织培养，尤其涉及用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗的生产方法。

背景技术

   淡黄花百合(Li lium sulphureum Baker)是百合科百合属中的一个野生种, 产于贵州省, 为多年生宿根草本植物, 为药食两用型, 具有较高的经济价值。但由于开发过度, 目前已处于濒危状态。淡黄花百合常规以分球、鳞片扦插、种子等繁殖, 但繁殖系数低, 而且长期营养繁殖易造成病毒感染从而严重影响品质和产量, 组织培养快繁是解决上述问题的有效途径。国内外已有关于不同百合品种组织培养的报道, 但对淡黄花百合的报道较少。

   李黛（2012）等采用野生淡黄花百合球茎鳞片为材料进行扦插繁殖研究表明，采用淡黄花百合中层鳞片，将花盆口用塑料薄膜密封进行保湿扦插，成活率达到86.66%，增值系数为1.85；张文娥（2008）等，以8月下旬采取粒径大于等于1 cm的珠芽，剥去外层鳞片后接种在附加0.1 mgLIBA的1/2MS培养基上的不定芽的诱导效果最好，培养基类型和继代时间对增殖培养有显著影响，以40 d内转接继代在1/2MS+0.1 mg/LKT+0.1 mg/LIBA的培养基上的增殖效果最好，其愈伤组织诱导率达97.3％，小鳞茎诱导率高达100％ ，且不定芽生长健壮。在1/2MS+0.1 mg/LIBA培养基上生长和生根情况均为良好；周洪英（2007）等采用腐殖土为基质，“十”字形切割发，淡黄花百合单片鳞茎繁殖系数可达4以上；杨雪清（2007）等以淡黄花百合的鳞片、叶片、叶柄为外植体，建立了淡黄花百合的快速无性繁殖体系，鳞片为最佳外植体, MS +2. 0mg /L 6-BA +0. 3mg /L NAA为小鳞茎最佳诱导培养基, 诱导率最高达到95. 0 %，平均小鳞茎增殖系数最高可达8. 6 ，叶片、叶柄最佳小鳞茎诱导培养基为MS +2.0mg /L6-BA +0.5mg /L NA A；李黛（2005）等以MS为基本培养基，研究不同浓度蔗糖、6-BA及NAA对淡黄花百合芽增殖和愈伤组织生长的影响，结果表明：芽增殖的最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+4%蔗糖。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+0.5mg/L6-BA+1mg/L NAA+3%蔗糖；邱宁宏(2004)等以淡黄花百合的鳞片为外植体进行试管培养，筛选出各培养阶段适宜的培养基分别为：1)丛生芽诱导，MS+2.0 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA +3%蔗糖；2)继代增殖，MS+ 1.5 mg/L 6-BA + 0.1mg/L NAA +3%蔗糖；3)生根及小鳞茎生长，1/2 MS+ 0.5～1.0 mg/L NAA +3%蔗糖+0.1%活性碳，1/2 MS+ 0.5mg/L NAA +6％蔗糖+0.1%活性碳。