[发明专利]一种增强型绿色荧光蛋白有效
| 申请号： | 201410599023.9 | 申请日： | 2014-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN105585625B | 公开（公告）日： | 2020-06-26 |
| 发明（设计）人： | 孙春昀;谢良志;任为;高一夫;尹怀奇 | 申请（专利权）人： | 北京义翘神州科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12N15/62;C12N15/63;G01N21/64 |
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| 地址： | 100176 北京市大兴*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 增强 绿色 荧光 蛋白 | ||
【权利要求书】：
1.一种增强型绿色荧光蛋白GFPSpark，其特征在于：
a)氨基酸序列为SEQ.ID.NO:13；
b)包含三个位点的氨基酸突变的组合：Q81K,V164A,I168V；
c)具有更强的荧光亮度；
d)具有更快的荧光蛋白和荧光基团的成熟速度。
2.一种定位蛋白细胞器和/或细胞外表达的方法，该方法包括：
a)采用基因工程技术将目的蛋白基因和编码权利要求1所述的增强型绿色荧光蛋白GFPSpark的基因序列SEQ.ID.NO:6融合；
b)将a)的融合基因序列插入到适合的表达载体中；
c)将融合蛋白表达载体转染细胞，并在上述细胞的最适培养条件下培养合适的时间；
d)在权利要求1所述荧光蛋白的最佳激发光谱下观察目的蛋白在细胞中的表达定位。
3.权利要求2所述的方法，其中序列SEQ.ID.NO:6在目的基因的C端或N端进行融合表达。
4.权利要求2所述的方法，其中适用的表达载体为哺乳动物真核表达载体pCMV3。
5.权利要求2所述的方法，其中适用的表达载体选自细菌，昆虫，酵母和慢病毒表达载体。
6.权利要求2所述的方法，其中适用的表达细胞系选自哺乳动物细胞，昆虫细胞，酵母细胞和细菌。
7.权利要求2所述的方法，其用于检测蛋白的表达定位，蛋白间的相互作用，表达元件的功能，细胞器指示功能。
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