[发明专利]适配体磁富集和RCA双信号放大检测肿瘤细胞方法及应用有效
| 申请号： | 201410605342.6 | 申请日： | 2014-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN104388549A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 赵永祥;李霞;卢小玲;黄勇 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 530021 广*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 适配体磁 富集 rca 信号 放大 检测 肿瘤 细胞 方法 应用 | ||
1.一种用于白血病细胞检测的探针组，由如下(a)和(b)组成：
(a)磁珠捕获探针；
所述磁珠捕获探针由磁珠和固定于所述磁珠上的捕获探针组成；所述捕获探针为序列表中序列1所示的单链DNA分子；
(b)检测探针或所述检测探针的前体；
所述检测探针的前体由靶序列和磷酸标记的锁式探针组成；所述靶序列为序列表中序列2所示的单链DNA分子；所述磷酸标记的锁式探针的核苷酸序列为序列表中序列3所示的单链DNA分子；
所述检测探针是由环化的所述磷酸标记的锁式探针与所述靶序列结合而成。
2.根据权利要求1所述的探针组，其特征在于：所述检测探针是按照包括如下步骤的方法由所述检测探针的前体制备得到的：将所述靶序列和所述磷酸标记的锁式探针按照摩尔比为1：(2-4)的比例混合，95℃孵育5-10min后，加入DNA连接酶15-20℃孵育10-16h，得到所述检测探针。
3.根据权利要求1或2所述的探针组，其特征在于：所述磁珠捕获探针按照包括如下步骤的方法制备得到：将经生物素标记的所述捕获探针与经链霉亲和素标记的所述磁珠共同孵育，获得所述磁珠捕获探针。
4.根据权利要求1-3中任一所述的探针组，其特征在于：进行所述孵育时，经生物素标记的所述捕获探针与经链霉亲和素标记的所述磁珠的配比具体为75pmol：1mg；
所述孵育具体为20-30℃80-150rpm震荡孵育10-30min；
所述孵育的液体环境具体为结合缓冲液；所述结合缓冲液的溶剂为水，溶质及浓度如下：NaCl8g/L，KCl0.2g/L，CaCl20.14g/L，Na2HPO4·H2O0.1g/L，MgCl2·6H2O1.42g/L，NaHCO30.35g/L，KH2PO40.2g/L，葡萄糖4.5g/L。
5.含有权利要求1-4中任一所述的探针组的试剂盒。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有分子信标；
所述分子信标为由一端带有荧光基团，另一端带有淬灭基团，核苷酸序列为序列表中序列4所示单链DAN分子形成的颈环结构。
7.权利要求1-4中任一所述的探针组，或权利要求5或6所述的试剂盒，在如下任一中的应用：
(a)制备用于白血病细胞检测的试剂盒；
(b)制备用于白血病病情监测的试剂盒。
8.根据权利要求1-8中任一所述的探针组或试剂盒或应用，其特征在于：所述白血病细胞检测为从待测者的外周全血、骨髓细胞、白细胞或淋巴细胞中检测白血病细胞。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：进行所述白血病病情监测时，采用的待测样本为待测者的外周全血、骨髓细胞、白细胞或淋巴细胞。
10.权利要求1中所述的检测探针或所述检测探针的前体。
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