[发明专利]一种诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法

权利要求书

1.一种诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，包括以下操作：

克隆牛C/EBPβ基因序列并在其上游添加Kozak序列，然后将克隆的C/EBPβ基因构建到穿梭载体中，再通过穿梭载体与腺病毒骨架载体的同源重组，将C/EBPβ基因构建到腺病毒骨架载体当中，得到重组腺病毒载体；

将重组腺病毒载体转染宿主细胞，在重组腺病毒载体被表达后，获取包含C/EBPβ基因的重组腺病毒Ad-C/EBPβ；

将重组腺病毒Ad-C/EBPβ侵染原代牛成纤维细胞/成肌细胞进行诱导转分化，在侵染6天后，牛成纤维细胞/成肌细胞被诱导转分化为牛脂肪细胞。

2.如权利要求1所述的诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，所述的牛C/EBPβ基因序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述的Kozak序列为GCCACC。

3.如权利要求1所述的诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，所述的穿梭载体为pAdTrack-CMV，所述的腺病毒骨架载体为pAdEasy-1，所述的宿主细胞为HEK293A细胞。

4.如权利要求1所述的诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，在重组腺病毒Ad-C/EBPβ侵染后，包括PPARγ、ACCα、FAS、LPL在内的与脂肪细胞分化相关的关键基因表达被上调，成脂分化过程被激活。

5.如权利要求1所述的诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为脂肪细胞的方法，其特征在于，在侵染6天后，所诱导转分化的牛脂肪细胞中有脂滴形成。

6.牛C/EBPβ基因在诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为牛脂肪细胞中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，牛C/EBPβ基因通过构建重组腺病毒侵染进入到细胞中进行诱导转分化。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，牛C/EBPβ基因通过激活与脂肪细胞转分化相关基因进行诱导转分化。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的转分化相关基因包括PPARγ、ACCα、FAS和LPL。

10.在转基因动物育种中牛C/EBPβ基因诱导牛成纤维细胞/成肌细胞转分化为牛脂肪细胞的应用。