[发明专利]黄瓜抗西瓜花叶病毒基因wmv的Indel标记及其应用有效
| 申请号： | 201410608279.1 | 申请日： | 2014-11-03 |
| 公开（公告）号： | CN104372085A | 公开（公告）日： | 2015-02-25 |
| 发明（设计）人： | 顾兴芳;张圣平;苗晗;田桂丽;王烨;杨宇红;谢丙炎 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 吴泳历 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黄瓜 西瓜 花叶 病毒 基因 wmv indel 标记 及其 应用 | ||
1.一种与黄瓜抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的Indel标记，其特征在于：所述标记的引物的核苷酸序列如下：
wmvIndel3-F/wmvIndel3-R：
AGGGTATCTTTGGATGTCAGAA/TGTGTTGTGTAGTGTAGGAAGG
所述引物扩增的与黄瓜感西瓜花叶病毒基因WMV连锁的特征条带为173bp，其核苷酸序列如Seq ID No.1所示；
所述引物扩增的与黄瓜抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的特征条带为169bp，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示。
2.权利要求1所述Indel标记在筛选具有抗西瓜花叶病毒基因wmv的黄瓜种质资源中的应用，其特征在于，包括如下步骤：
(1)采用所述Indel标记的引物对待选黄瓜材料的基因组DNA进行PCR扩增；所述标记的引物的核苷酸序列如下：wmvIndel3-F/wmvIndel3-R：AGGGTATCTTTGGATGTCAGAA/TGTGTTGTGTAGTGTAGGAAGG；
(2)对扩增结果进行凝胶电泳检测；
(3)从检测结果中筛选出现与抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的Indel标记特征条带一致的材料，所述抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的Indel标记特征条带为169bp，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示。
3.根据权利要求2所述的应用，其中，所述PCR扩增的反应体系为:1.5ng/μl DNA模板，所述引物正向和反向各5ng/μl，0.5μl/μl GoGreen Master Mix，其余为双蒸水。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其中，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性4分钟；94℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟，16℃保存。
5.根据权利要求2-4任一所述的应用，其中所述凝胶电泳检测，指采用6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，于150V恒功率电泳分离，最后银染显色。
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