[发明专利]黄瓜抗西瓜花叶病毒基因wmv的Indel标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术辅助育种技术领域，特别涉及一种黄瓜中抗西瓜花叶病毒基因wmv的Indel标记及其在黄瓜育种材料选择中的应用。 

背景技术

病毒病是影响黄瓜生产的主要病害之一，病原种类繁多，难以防治。其中西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus，WMV)就是引起该病的一种主要病原。WMV属于马铃薯Y病毒属病毒，该病毒属世界各地均有分布。在自然界，主要以非持久性方式经蚜虫传播，也可以经汁液的机械接种传染，可侵染葫芦科、豆科、藜科等多种植物种类。感病植株叶片表现花叶、畸形、新生叶片扭曲，植株生长受阻，果实畸形。 

目前，在黄瓜上已经挖掘了一些抗WMV的种质资源，而且前人也利用了其中一些抗病材料对黄瓜WMV抗性遗传规律及分子标记进行了初步研究，Cohen等(1971)研究发现黄瓜栽培种Kyoto 3 Feet中存在抗WMV的显性基因；Wai(1995a)和Grumet(1995b)在TMG-1中发现WMV的抗性分两种基因控制：一种是在子叶和全株均表现抗性的wmv-2，另一种是只在真叶表现抗性的2个相互作用的上位基因wmv-3和wmv-4。张海英等(2005)以感病亲本自交系欧洲八号和抗病亲本自交系秋棚构建的RILs群体为材料，对WMV进行了抗病性鉴定，研究表明抗病性状是受隐性单基因控制的，但同时也存在微效基因的修饰。目前报道的与WMV抗性相关的遗传连锁标记有AFLP、RAPD、SSR标记，但是这些标记与抗病基因连锁距离较远，并不能有效地应用于实际育种工作中。 

发明内容

基于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种与黄瓜中抗WMV基因wmv紧密连锁的Indel标记，并提供了该标记在筛选对WMV抗病或感病的黄瓜种质资源上的应用。 

本发明的技术方案如下： 

一种与黄瓜抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的Indel标记，其特征在于：所述标记的引物的核苷酸序列如下： 

wmvIndel3-F/wmvIndel3-R： 

AGGGTATCTTTGGATGTCAGAA/TGTGTTGTGTAGTGTAGGAAGG 

所述引物扩增的与黄瓜感西瓜花叶病毒基因WMV连锁的特征条带为173bp，其核苷酸序列如Seq ID No.1所示； 

所述引物扩增的与黄瓜抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的特征条带为169bp，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示。 

所述Indel标记在筛选具有抗西瓜花叶病毒基因wmv的黄瓜种质资源中的应用，其特征在于，包括如下步骤： 

(1)采用所述Indel标记的引物对待选黄瓜材料的基因组DNA进行PCR扩增；所述标记的引物的核苷酸序列如下：wmvIndel3-F/wmvIndel3-R： 

AGGGTATCTTTGGATGTCAGAA/TGTGTTGTGTAGTGTAGGAAGG； 

(2)对扩增结果进行凝胶电泳检测； 

(3)从检测结果中筛选出现与抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的Indel标记特征条带一致的材料，所述抗西瓜花叶病毒基因wmv连锁的Indel标记特征条带为169bp，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示。 

所述PCR扩增的反应体系为:1.5ng/μl DNA模板，所述引物正向和反向各5ng/μl，0.5μl/μl GoGreen Master Mix，其余为双蒸水。 

所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性4分钟；94℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟，16℃保存。 

所述凝胶电泳检测，指采用6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，于150V恒功率电泳分离，最后银染显色。