[发明专利]一种烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法

权利要求书

1.一种烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取烟草中的目标物：

称取烘干磨好的烟叶样品，加入纯水浸润，依次加入内标和乙腈，涡漩混合振荡；放入冰箱冷冻后取出，依次加入无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠，涡旋振荡后离心；

2）N-丙基乙二胺纯化：

移取上清液于新的离心管中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂，于漩涡振荡混合，然后高速离心；吸取上清液经有机相滤膜过滤，移取滤液，并用乙腈和超纯水稀释后待测；

3）标准储备液和标准工作液的配制：

用乙腈配制氟节胺、仲丁灵和除芽通标准储备液，储存于棕色玻璃瓶中，-20℃保存；取一定量的各化合物储备液进行混合，用乙腈稀释定容，制得混合标准储备液；

用乙腈准确配制二甲戊灵-d₅内标储备液，用内标储备液配制内标工作液，储存于棕色玻璃瓶中；所有的储备液于-20℃保存，使用前将其恢复到室温；

用空白烟叶的萃取基质配制不同浓度的氟节胺，仲丁灵和除芽通标准工作溶液；

4）液相色谱-串联质谱测定：

吸取空白烟叶溶液和配制好的不同浓度的氟节胺、仲丁灵和除芽通标准工作溶液，注入串联质谱检测器，按内标法以峰面积计算出样品待测液中氟节胺、仲丁灵和除芽通含量；

前述串联质谱检测器为UPLC-MS/MS系统，选取的色谱柱为UPLC色谱柱：UPLC HSS T3，规格为100 mm×2.1 mm、1.8μm，柱温35°C；进样量10μL；串联质谱检测的条件为：电喷雾离子源，喷雾电压：2.6 kV；离子化温度350 ℃；雾化气流量：1000 L/Hr； 锥孔气流量50 L/Hr； 碰撞气流量为0.15 ml/min； 碰撞气为氩气，其余气体为氮气； 驻留时间为30 msec，正离子MRM模式采集；洗脱条件为梯度洗脱，选取70%流动相A：甲酸水和30%流动相B：甲酸甲醇溶液初始流动相体系，分析时间为5min，进样量为5μL；所述甲酸水中甲酸体积分数为0.1%，所述甲酸甲醇溶液中甲酸体积分数为0.1%。

2.根据权利要求1所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，所述步骤1）中提取过程依次加入的超纯水，10μg/mL内标，乙腈的体积分别为200μL和10mL。

3.根据权利要求2所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，所述涡漩振荡速率为2000rpm，震荡时间1min，离心管在-10℃条件下保持10min。

4.根据权利要求3所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，所述无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠和柠檬酸二氢钠的质量分别为4g、1g、1g和0.5g。

5.根据权利要求4所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，所述漩涡混合振荡的速率为2000rpm，振荡时间为2min，以4000rpm的速率离心10min。

6.根据权利要求1所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，步骤2）中，加入无水硫酸镁及PSA吸附剂的质量为150mg和25mg。

7.根据权利要求1所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，所述步骤2）中移取滤液体积为200μL，加入乙腈和超纯水的体积为100μL和700μL。

8.根据权利要求1所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，步骤4）中，梯度洗脱条件为：0~2min，90%A~50%A；2~2.4min，50%A~30%A；2.4~4.0min，30%A~20%A；4.0~6.0min，20%A~5%A，6.0~9.8min，5%A~5%A；9.8~10.0min，5%A~90%A，10.0~12.0min，90%A~90%A；流动相流速为0.3mL/min。

9.根据权利要求1所述的烟草中氟节胺、仲丁灵和除芽通残留量的测定方法，其特征在于，步骤4）中测定烟草中氟节胺，仲丁灵和除芽通含量的具体操作为：吸取标准空白烟草和配制好的不同浓度的氟节胺，仲丁灵和除芽通标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，绘制氟节胺，仲丁灵和除芽通的线性回归方程，对纯化稀释后的样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。