[发明专利]一种LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法

权利要求书

1.一种LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，其特征在于：采用提取溶剂低温超声萃取，通过液相色谱-串联质谱联用仪LC-MS/MS实现新鲜烟叶中异戊烯基焦磷酸IPP、牻牛儿基焦磷酸GPP、法呢基焦磷酸FPP和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸GGPP的检测，具体步骤如下：

1）配制提取溶剂：甲醇/氨水=70/30，v/v；

2）新鲜烟叶液氮速冻，冷冻干燥，粉碎机打碎；

3）粉碎好的样品加入提取溶剂和氘代内标，0-10℃低温超声提取；

4）提取完的样品冷冻离心，取上清液过0.22 μm微孔滤膜；

5）LC-MS/MS对待测样品中IPP、GPP、FPP和GGPP进行检测，液相色谱、质谱条件如下：

Agilent公司Poroshell 120 EC-C18色谱柱，规格2.1 mm×100 mm i.d.，2.7 μm；柱温20 ℃；流动相为：A：5 mM NH₄HCO₃的水，B：含0. 005%甲酸的乙腈；流速：0.4 mL min^-1；梯度洗脱：0 min：99%A+1% B，2 min：98%A+2%B，2.1 min：90%A+10%B，8 min：20%A+80%B，8.1 min-10 min：0%A+100%B，10.1 min-12 min：99%A+1% B；进样量：5 μL；

离子源：电喷雾离子源；负离子扫描；多反应监测；干燥气温度：180℃，干燥气流量：11 L min^-1，雾化器压力：20 psi；鞘气温度：400 ℃，鞘气流量：12 L min^-1，毛细管电压：2500 V，喷嘴电压：2000 V；驻留时间：50 ms。

2.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，其特征在于：所述的氘代内标为ABA-d6。

3.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，其特征在于：所述的超声提取时间为30 min。

4.根据权利要求1所述的LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，其特征在于：离心时离心机转速为8000转，离心时间为5 min。