[发明专利]一种叶酸偶联的金纳米棒/聚吡咯/四氧化三铁多功能复合纳米诊疗剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米诊疗剂领域，特别涉及一种叶酸偶联的金纳米棒/聚吡咯/四氧化三铁多功能复合纳米诊疗剂的制备方法。

背景技术

肿瘤已经成为导致人类死亡的主要疾病之一，全球每年确诊的肿瘤患者数以千万，死于肿瘤的患者高达百万人次。目前仍沿用早期的诊断、放疗和化疗等手段进行肿瘤治疗。在一定程度上，传统的肿瘤化疗方法虽然能起到治疗肿瘤的效果，但是由于缺乏靶向性，随着治疗的深入会导致患者的免疫力低下，这给患者的身心带来巨大痛苦。此外，肿瘤是一种多机制的复杂疾病，80％的肿瘤患者在被确诊时癌细胞就已经发生转移。因此，采用新技术提高对肿瘤的预警、早期诊断、转移监测的能力以及寻找安全、有效和经济的治疗方法已成为目前临床亟待解决的问题。

纳米材料因其独特的优势有望解决传统医学方法所不能解决的问题，这务必将引起现代医学诊断和治疗的新变革。纳米技术与肿瘤医学相结合形成的纳米肿瘤医学是纳米医学中的新兴领域，也是当前各国前沿科技优先发展的核心领域。同时，纳米生物医学的快速发展为开发安全、高效、特异、智能和靶向性的纳米探针提供了新的思路。

目前，肿瘤的临床诊断主要依赖于两种方法：(1)生物学检测方法，包括免疫学检测、免疫组化、基因芯片和聚合酶链式反应技术；(2)医学影像学方法，包括核磁共振成像技术、X-射线计算机断层成像技术、核医学成像技术和超声成像技术等。若将具有先进功能的纳米材料以及智能响应性的纳米结构应用于肿瘤分子的影像研究，这与传统的体外诊断相比，不仅能为肿瘤的早期诊断及转移预警提供强有力的手段，而且还可以为肿瘤的发展过程提供更为直观且丰富的证据。肿瘤分子影像已经成为纳米肿瘤医学研究中的重中之重。在肿瘤分子影像的基础上，再结合药物、光动力或光热等治疗性方法，将创造出集诊断和治疗于一体的多功能纳米诊疗剂，这已成为目前纳米分子影像学和纳米生物医学领域的研究热点。

发明内容

本发明提出了一种叶酸偶联的金纳米棒/聚吡咯/四氧化三铁多功能复合纳米诊疗剂的制备方法，该方法设备装置简单，操作简便，有助于工业化生产；所获得的复合纳米诊疗剂分散性好，稳定性好，粒径均一，并具有良好的生物相容性和靶向性。

本发明的一种叶酸偶联的金纳米棒/聚吡咯/四氧化三铁多功能复合纳米诊疗剂的制备方法，包括：

(1)制备表面活性剂稳定的金纳米棒溶液；

(2)将三氯化铁加入到聚乙烯醇溶液中，加热充分搅拌，配制成聚合物溶液；

(3)将步骤(1)制备的金纳米棒溶液加入到步骤(2)制备的聚合物溶液中，超声分散，搅拌均匀；

(4)在冰浴条件下将吡咯单体逐滴加入步骤(3)制备的混合溶液中，搅拌10～60min后，置于低温环境中，保持3～24h，待溶液变成黑色，制得含有金纳米棒/聚吡咯复合纳米粒子的悬浮液；

(5)将步骤(4)制备的金纳米棒/聚吡咯纳米粒子的悬浮液，用去离子水和乙醇稀释，升高温度，在氮气保护下，加入氨水溶液，反应10～40min后，再次加入氨水溶液，继续反应10～40min，得到金纳米棒/聚吡咯/四氧化三铁复合纳米诊疗剂，通过外加磁场，收集粒子；

(6)配制阳离子型聚电解质壳聚糖溶液和阴离子型聚电解质海藻酸钠溶液，然后依次分别加入到步骤(5)制备的粒子溶液中，离心洗涤分散，再分别加入壳聚糖和海藻酸钠溶液，搅拌0.2～2小时，离心洗涤分散，循环3～5遍，即层层自组装；

(7)将羟基琥珀酰亚胺、N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐和叶酸溶于去离子水中；

(8)收集步骤(6)制备的纳米粒子，分散在去离子水中，加入到步骤(7)溶液中，用三乙胺做催化剂，调节pH后，搅拌2～24h，离心收集洗涤，即得叶酸偶联的金纳米棒/聚吡咯/四氧化三铁多功能复合纳米诊疗剂。

所述步骤(2)中聚乙烯醇溶液的浓度为5～10％，三氯化铁与聚乙烯醇溶液的比例为100～500mg:10ml。

所述步骤(3)中金纳米棒溶液与聚合物溶液的体积比为1:5～10。

所述步骤(4)中吡咯单体与金纳米棒溶液的体积比为0.025～0.1:1。

所述步骤(4)中低温环境的温度为1～5℃。

所述步骤(5)中金纳米棒/聚吡咯纳米粒子的悬浮液体积为1～5mL，去离子水和乙醇体积比5～8:1，悬浮液稀释后的总体积为5～30mL；两次加入的氨水溶液与悬浮液的体积比分别为0.2～2:5～30。

所述步骤(5)中温度升高至50～80℃。