[发明专利]一种利用亚麻刺盘孢霉制备7α,15α-二羟基去氢表雄酮的方法有效
申请号: | 201410625399.2 | 申请日: | 2014-11-09 |
公开(公告)号: | CN104561216B | 公开(公告)日: | 2019-01-11 |
发明(设计)人: | 张峥斌;张汝金;尹金玉;高成华 | 申请(专利权)人: | 浙江仙居君业药业有限公司 |
主分类号: | C12P33/06 | 分类号: | C12P33/06;C12R1/645 |
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地址: | 317300 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 去氢表雄酮 亚麻 二羟基 刺盘 孢霉 菌体培养液 菌体培养 壳聚糖 转化液 羧甲基 制备 乙酸乙酯提取 菌体培养基 产物提取 搅拌转速 生产菌种 生物转化 斜面培养 孢子接种 孢子培养 重量比 孢子 浓缩 成熟 转化 | ||
1.一种利用亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)ST-1制备7α,15α-二羟基去氢表雄酮的方法,所述亚麻刺盘孢霉保藏编号为为CGMCC No.6051,所述方法包括以下步骤
(1)孢子培养,将保藏号为CGMCC No.6051的亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)ST-1作为生产菌种,经斜面培养得到成熟孢子;
(2)菌体培养,步骤(1)得到的孢子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌体培养液;
(3)生物转化,向步骤(1)中的菌体培养液中加入羧甲基油酰壳聚糖和DHEA,DHEA的终浓度为10.5~12g/L,羧甲基油酰壳聚糖和DHEA的重量比为2~3:1,在28~30℃下,200~220r/min的搅拌转速下转化36~60h,即得转化液,所述的羧甲基油酰壳聚糖的羧甲基取代度为0.58~0.62,油酰基取代度为0.08~0.09;
(4)产物提取,将转化液用乙酸乙酯提取浓缩,得到7α,15α-二羟基去氢表雄酮。
2.如权利要求1所述的一种利用亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)ST-1制备7α,15α-二羟基去氢表雄酮的方法,其特征是斜面培养的培养基为PDA培养基,其组成为成分及配比为,土豆淀粉200~500g/L,葡萄糖30~50g/L,酵母粉5~10g/L,琼脂粉15~20g/L以及余量的蒸馏水;用于菌体培养的菌体培养基的成分及配比为,葡萄糖10~15g/L,豆饼粉8~15g/L,酵母粉10~15g/L,玉米浆2~3g/L及余量的蒸馏水。
3.如权利要求1或2所述的一种利用亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)ST-1制备7α,15α-二羟基去氢表雄酮的方法,其特征是
所述步骤(1)的工艺为:将亚麻刺盘胞菌(Colletotrichum lini)ST-1按活化后,接种到斜面培养的培养基上,置于28-32℃的恒温培养箱中进行斜面培养得到成熟的孢子,培养时间3~5天;
所述步骤(2)的菌体培养工艺分为为一次培养和二次培养;
一次培养,将步骤(1)得到的孢子接种于80~120mL菌体培养基中,在28~30℃下振荡培养18-36h得到一次培养液;
二次培养,将一次培养液以体积百分比3-5%的接种量接入菌体培养基中,以与一次培养相同的条件继续培养18-36h,得到菌体培养液。
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