[发明专利]一种利用亚麻刺盘孢霉制备7α，15α-二羟基去氢表雄酮的方法

说明书

一种利用亚麻刺盘孢霉制备7α，15α‑二羟基去氢表雄酮的方法，所述方法包括以下步骤(1)孢子培养，亚麻刺盘孢霉ST‑1作为生产菌种，经斜面培养得到成熟孢子；(2)菌体培养，步骤(1)得到的孢子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌体培养液；(3)生物转化，向步骤(1)中的菌体培养液中加入羧甲基油酰壳聚糖和DHEA，DHEA的终浓度为10.5～12g/L，羧甲基油酰壳聚糖和DHEA的重量比为2～3∶1，在28～30℃下，200～220r/min的搅拌转速下转化36～60h，即得转化液；(4)产物提取，将转化液用乙酸乙酯提取浓缩，得到7α，15α‑二羟基去氢表雄酮。

技术领域

本发明甾体化合物生物转化方法具体的设计一种羟化方法。

背景技术

屈螺酮是一种新型的孕激素，因其具有一定的盐皮质激素作用，在用于制备口服短效避孕药时，可以克服一般孕激素带来的体重增加的副作用。7α，15α-二羟基去氢表雄酮(即7α，15α-二羟基去氢表雄酮，简称7α，15α-diOH-DHEA，CAS：2963-69-1)则是生产屈螺酮的重要中间体，因合成困难，一般采用或去氢表雄酮(DHEA)生物转化法生产。

中国专利CN102703558B公开了一种采用亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)ST-1(保藏编号为CGMCC No.6051)将DHEA转化为7α-羟基-去氢表雄酮和7α，15α-二羟基去氢表雄酮和转化方法，采用了将底物与等摩尔比的甲基-β-环糊精预包合后再投料的方式，并生成能够提高了底物的溶解度和转化效率，经过我们实验方法，这种方法对于菌种有很高的选择性，即不同的菌种在处理甲基-β-环糊精预包合的底物时，结果并不一致，当采用亚麻刺盘孢霉处理甲基-β-环糊精预包合的底物时效果并不好，且该方法得到的产物为7α-羟基去氢表雄酮与7α，15α-二羟基去氢表雄酮的混合物，根据该专利公开数据，在转化产物中仅有60％为7α，15α-二羟基去氢表雄酮，且这两种产物分离较为困难。

中国专利CN 102757997A公开了一种采用底物诱导法制备7α，15α-二羟基雄甾烯酮(即7α，15α-二羟基去氢表雄酮)的方法，分次添加底物，使底物的最终添加浓度达到8-10g/L，并能将转化率提高到90％左右，然而经过我们实验发现，这种方法需要延长总发酵时间，从而影响生产效率，且该方法中采用的接种量为8-10％，较大的接种量实际上也会制约生产规模的扩大。

因此在采用亚麻刺盘孢霉将DHEA转化为7α，15α-二羟基去氢表雄酮的生物发酵中，进一步优化发酵条件，提高底物的转化率和投料浓度，成为现有技术中亟待解决的问题

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种改进的利用亚麻刺盘孢霉制备7α，15α-二羟基去氢表雄酮的方法，在研究中为我们惊奇的发现，现有技术中通常被用作抑菌剂的某种壳聚糖衍生物，能够意外的提高亚麻刺盘孢霉发酵制备7α，15α-二羟基去氢表雄酮时的转化率和投料浓度。

本发明提供了一种利用亚麻刺盘孢霉(Colletotrichum lini)ST-1制备7α，15α-二羟基去氢表雄酮的方法，所述亚麻刺盘孢霉保藏编号为为CGMCC No.6051，所述方法包括以下步骤(1)孢子培养，将保藏号为CGMCC No.6051的亚麻刺盘孢霉(Colletotrichumlini)ST-1作为生产菌种，经斜面培养得到成熟孢子；

(2)菌体培养，步骤(1)得到的孢子接种到的菌体培养基中进行菌体培养得到菌体培养液；

(3)生物转化，向步骤(1)中的菌体培养液中加入羧甲基油酰壳聚糖和DHEA，DHEA的终浓度为10.5～12g/L，羧甲基油酰壳聚糖和DHEA的重量比为2～3∶1，在28～30℃下，200～220 r/min的搅拌转速下转化36～60h，即得转化液。

(4)产物提取，将转化液用乙酸乙酯提取浓缩，得到7α，15α-二羟基去氢表雄酮。