[发明专利]一种金钗石斛多糖和总碱的提取分离方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种提取分离方法，具体地说是一种金钗石斛多糖和总碱的提取分离方法，属于农业产品深加工领域。

二、背景技术

石斛属属于兰科，为多年生草本植物，全球目前发现的有1500多种，在我国已知的有78种。金钗石斛是中国药典2010版收录名称定义的中药材，是众多石斛属植物中生物总碱含量最高且唯一含有石斛碱的中药石斛品种，其化学成分较复杂，主要是生物碱和多糖类物质。石斛碱具有止痛、解热、降低心率和血压、减慢呼吸、解巴比妥毒等作用；金钗石斛多糖有抗氧化、抗肿瘤、降血糖、防治白内障及增强机体的免疫力等作用。

金钗石斛作为传统中药，但其大规模种植生产仅有20余年，目前市场上开发的保健品有石斛胶囊、石斛粉和石斛超微粉、石斛冲剂、石斛晶、石斛颗粒、石斛露、石斛茶、石斛酒等，但剂型多半比较简单，国内外市场尚未见到技术含量较高、针对性较强、功效明确的产品。金钗石斛相关产品的开发目前尚处于初级阶段，开发一种简捷高效的金钗石斛深加工技术对于整个产业的发展意义重大。

目前国内外在金钗石斛多糖与生物总碱的提取方面，大都采用分开提取的方法，这样就会使得提取周期长，生产效益低，不利于大规模生产，并且造成了原料的利用率较低的现象。CN101407557公开了一种金钗石斛多糖提取物的制备和应用，该方法经石油醚脱脂、高温提取、乙醇沉淀、Sevage试剂除蛋白、除单糖和寡糖、凝胶柱纯化等步骤实现了对金钗石斛多糖的提取，虽然此法得到的石斛多糖含量较高，但是得率较低，高温可能部分破坏石斛多糖的生物活性，生产复杂，周期长，成本高，污染严重，在工业生产中不易实现。CN101735231A采用高浓度乙醇高温浸提提取石斛生物碱的方法，需要设备要求高，能耗大，效率低，而且使用氯仿和乙醚进行萃取，毒性较大，污染严重。

三、发明内容

本发明旨在提供一种金钗石斛多糖和总碱的提取分离方法，是通过高压均质联合超滤技术提取金钗石斛多糖和总碱，具有产品纯度高、工艺简捷、生产周期短、提取条件温和、生产成本低的优点。

本发明金钗石斛多糖和总碱的提取分离方法，包括以下步骤：

1)样品前处理

将粗细均匀、颜色亮黄的金钗石斛茎秆水洗后烘干，粉碎后过60-80目筛得金钗石斛粉料；

2)酶解

将步骤1)制得的金钗石斛粉料加入3-5倍质量的水中，再加入生物酶，通过柠檬酸调pH值至酸性，进行酶解；金钗石斛细胞壁含有大量的纤维素和果胶，不仅会影响石斛多糖和总碱的溶出，还会导致附带产物蛋白质含量的偏高，本申请通过加入生物酶使蛋白、纤维素和果胶质类物质水解、粘度降低，提高了有效物质的溶出率，提高了有效成分的含量。

所述生物酶由纤维素酶、果胶酶和蛋白酶组成，按质量百分比构成如下：

纤维素酶10-20％，果胶酶20-40％，蛋白酶30-50％。

所述生物酶的添加量为金钗石斛粉料质量的0.1-1％。

所述酶解的时间为3-10h，温度为35-55℃，较佳pH值为4.0-5.0。

3)高压均质提取

向酶解后得到的固液混合物中补加水使得固液混合物中含水质量为金钗石斛粉料质量的10-30倍，通过柠檬酸调pH值至2.0-5.0，搅拌混匀，高压均质提取后(提取压力为40-80MPa)离心除渣，收集上清液；高压均质提取技术可以在低温下快速提取有效成分，有利于保证化学成分的功效性，缩短了工艺操作时间；

4)絮凝

将步骤3)所得上清液的pH值调至3.0，加入所述上清液质量0.8-1％的絮凝剂，室温下静置20-30min，离心去沉淀；所述絮凝剂为质量浓度1％的壳聚糖溶液。

5)超滤分离

将步骤4)所得滤液用1000Da分子量的超滤膜进行超滤分离，得到透过液与截留液；将所得截留液浓缩后冷冻干燥(-50℃，0.1MPa)，即可得到金钗石斛多糖；将透过液浓缩后冷冻干燥(-50℃，0.1MPa)，即可得到金钗石斛总碱。金钗石斛总碱包括5种已知的倍半萜类生物碱，分子量只有几百，是小分子物质，可以透过超滤膜而留在透过液里面；多糖是天然大分子物质，不能透过超滤膜残留在截流液中。

本发明中，所述金钗石斛为兰科石斛兰属金钗石斛的茎，本领域人员均知，为中国药典2010版收录名称定义的中药材。

除特殊说明外，本发明所用试剂均为分析纯或食品级；调pH值所使用的为柠檬酸和氢氧化钠。

本发明中总糖含量用苯酚-硫酸法测量，总碱含量用紫外分光光度法测量，具体过程如下：1、石斛多糖含量检测方法