[发明专利]梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒，其特征在于设有外包装盒、碱性磷酸酶标记单克隆抗体瓶、发光底物瓶、梅毒螺旋体特异性抗体1000mIU/mL校准品瓶、500mIU/mL校准品瓶、200mIU/mL校准品瓶、50mIU/mL校准品瓶、10mIU/mL校准品瓶、0mIU/mL校准品瓶、洗涤液瓶、重组抗原包被微孔板；碱性磷酸酶标记单克隆抗体瓶、发光底物瓶、梅毒螺旋体特异性抗体1000mIU/mL校准品瓶、500mIU/mL校准品瓶、200mIU/mL校准品瓶、50mIU/mL校准品瓶、10mIU/mL校准品瓶、0mIU/mL校准品瓶、洗涤液瓶、重组抗原包被微孔板设在外包装盒内；碱性磷酸酶标记单克隆抗体瓶内装有碱性磷酸酶标记单克隆抗体，发光底物瓶内装有发光底物，梅毒螺旋体特异性抗体1000mIU/mL校准品瓶内装有梅毒螺旋体特异性抗体1000mIU/mL校准品，500mIU/mL校准品瓶内装有500mIU/mL校准品，200mIU/mL校准品瓶内装有200mIU/mL校准品，50mIU/mL校准品瓶内装有50mIU/mL校准品，10mIU/mL校准品瓶内装有10mIU/mL校准品，0mIU/mL校准品瓶内装有0mIU/mL校准品，洗涤液瓶内装有洗涤液瓶。

2.如权利要求1所述梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)制备梅毒螺旋体特异性重组抗原：

采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，得梅毒螺旋体特异性抗原TPN17和TPN47；

2)制备重组抗原包被微孔板

将步骤1)中的梅毒螺旋重组抗原TPN17和TPN47用包被缓冲液稀释至20μg/mL，以每孔0.1mL加入微孔板中，4℃包被24h；取出抗原板，风干；用0.01mmol/L pH7.4磷酸盐缓冲液配制的1.0％脱脂奶粉，每孔0.2mL，4℃封闭24h，取出用磷酸盐缓冲液洗涤5次，室温风干、消毒，制备重组抗原包被微孔板，密封备用；

3)制备天然膜蛋白单克隆抗体

提取梅毒螺旋体标准株Nichols株的膜蛋白，免疫Babl/c小鼠，利用杂交瘤细胞技术，筛选梅毒螺旋体特异性蛋白TPN17和TPN47的单克隆抗体；

4)单克隆抗体的碱性磷酸酶标记

碱性磷酸酶经过碘酸钠活化，分别与步骤3)单克隆抗体分子的-NH2偶联，形成碱性磷酸酶标记单克隆抗体；

5)发光底物制备

人工合成金刚烷胺类发光底物及其增强剂，均经无菌过滤，制备发光底物工作液；

6)洗涤液制备

洗涤液为溶有Tween-20的磷酸盐缓冲液，其中Tween-20的终浓度为0.01％；

7)校准品

将高值梅毒螺旋体特异性抗体用校准品稀释液稀释，用国家标准品重复标定三次，三次标定值，取均值作为标定的梅毒螺旋体特异性抗体浓度；所述校准品稀释液由0.05mmol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、0.01mmol/L的氯化钠的3％牛血清白蛋白组成，pH值7.4；

梅毒螺旋体特异性抗体标准品浓度系列1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL，分装成0.5mL/瓶，2～8℃或-20℃存放备用；

8)制备梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒

将碱性磷酸酶标记单克隆抗体、发光底物、洗涤液、校准品装入瓶中，再将碱性磷酸酶标记单克隆抗体瓶、发光底物瓶、洗涤液瓶、校准品瓶和重组抗原包被微孔板装入外包装盒中，组成梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒，所述校准品包括1000mIU/mL、500mIU/mL、200mIU/mL、50mIU/mL、10mIU/mL、0mIU/mL共6个浓度。

3.如权利要求2所述梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤3)中，所述梅毒螺旋体标准株Nichols株为Treponema pallidum ssp.pallidum strain Nichol。

4.如权利要求2所述梅毒螺旋体特异性抗体定量检测试剂盒的制备方法，其特征在于在步骤8)中，所述瓶采用聚乙烯瓶。