[发明专利]一种抗乙型肝炎病毒x蛋白抗体酶联免疫测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和免疫学领域，具体涉及检测肝癌标志物乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)抗体的试剂盒。

背景技术

人体我国每年约有11～13万人死于原发性肝癌，占全球肝癌死亡数的半数之多。近年来，通过提高肝癌早期诊断率、改进肝癌切除方法和实施肝移植等手段，我国部分肝癌高发地区的死亡率有所下降,但是肝癌总体的发病率仍然呈上升趋势。

目前，影像学诊断、细胞与组织学诊断及化学诊断是肿瘤诊断的三大主要方法。影像学诊断在肝癌诊断中起重要的作用，但是在诊断小肝癌及区分良恶性结节中均具有一定的局限。超声检查或CT阳性结果，结合血清甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)水平高于400ng/ml的检测结果，可对肝癌做出确诊。但是，通常当这些条件都符合时，己经错过了治疗的最佳时机。无论是超声波检查、CT扫描还是核磁共振，对小病灶的鉴定都有一定的局限性，尤其是肝硬化结节在影象学上与小肝癌结节有许多的相似之处。因此，虽然影像学技术在今年来取得了巨大的进步，但临床上仍需结合肝癌的分子标志物，在较为复杂的病例中将良恶性肝病进行区分。

目前肝癌诊断最常用的标志物是甲胎蛋白(AFP)，在症状和影像学改变发生前数月即可出现异常。正常人血清中AFP含量一般小于10ng/ml。当AFP的诊断值定为20ng/ml时，其敏感性为50％-60％，但在肿瘤较小的病例中，敏感性显著降低，有报道仅为40％。单独使用AFP作为肝癌诊断标志物的另一个问题是缺乏特异性，在相当多的慢性肝炎患者尤其是肝硬化患者中，AFP含量也达20-200ng/ml。目前认为可与AFP互补诊断的标志物有AFP异质体、Y一谷氨酞转移酶同工酶Ⅱ和异常凝血酶原等，但由于它们在敏感性和特异性上的不足，以及检测方法的繁琐复杂，使其始终停留在实验室研究水平，未能转化成临床常规检查项目。因此，探索新的肿瘤分子标志物，以及建立相应的易于推广的检测方法，仍是当今肝癌研究领域的重要课题之一。

随着对HBV和原发性肝癌研究的深入，人们发现HBV中的x基因表达产物(HBx)在肝癌形成过程中起着关键的作用。在诱发肝细胞癌的众多因素中，乙型肝炎病毒感染占到50％以上。最新的研究显示，HBx具有广泛的基因转录调控作用，与慢性HBV感染者发展成为HCC密切相关。x基因位于HBV基因组的1374-1836位置，编码155个氨基酸的多肽，即HBx。x基因常随HBV基因组一同整合于肝细胞的染色体中，利用宿主细胞转录和翻译体系合成HBx。HBx具有广泛的基因转录调控作用，不仅能够激活病毒基因调控序列，而且能够与宿主细胞多种蛋白相互作用，从而影响宿主细胞周期、影响细胞增殖分化与凋亡、使肝细胞发生恶性转化。HBx可与转录因子XPA-1、DDB1、RPB5和TFIIB结合，以提高基因转录水平、抑制DNA的修复、促进病毒自身复制；HBx还具有反式激活作用，可上调多种细胞因子及其受体，如血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)及其受体的表达；激活C-myt、N-ras等癌基因，与抑癌基因p53结合，抑制P53的核转移及正常的转录调节功能。此外，HBx还可上调HepG-2的细胞端粒酶活性，改变抑癌基因p55负调控功能，抑制细胞凋亡，四细胞发生恶性转化，与HCC的发生密切相关。近几年国外研究显示，在HBV感染后约60％肝癌患者血清中可检测到HBx抗体。血清HBx抗体水平可能成为一种新型的肝癌标志物。

目前，免疫分析技术在乙型肝炎病毒x蛋白抗体免疫分析产品的应用方面仍未见。因此，本领域迫切需要开发可灵敏检测乙型肝炎病毒x蛋白抗体的检测系统及检测方法，为临床肿瘤的诊断提供良好的途径。

发明内容

本发明提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测乙型肝炎病毒x蛋白抗体的试剂盒，该试剂盒适于在产业上有效地推广应用。

本发明提供了一种抗乙型肝炎病毒x(HBx)蛋白抗体酶联免疫测定试剂盒及其制备方法。

该抗乙型肝炎病毒x蛋白抗体酶联免疫测定试剂盒包括：1)重组乙型肝炎病毒x蛋白；2)抗乙型肝炎病毒x蛋白抗体阴、阳性对照品；3)酶标记结合物；4)显色底物；5)浓缩洗涤液。