[发明专利]抗人脂联素的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为保藏号为CGMCC No.9568的C2001或保藏号为CGMCC No.9908的6C3‑Ⅰ，以及所述杂交瘤细胞株产生的抗人脂联素单克隆抗体A25或C63，本发明提供的抗人脂联素单克隆抗体可以用于在生物样本中定量或定性检测人总脂联素。本发明还提供了一种人总脂联素的检测试剂盒。本发明的人脂联素单克隆抗体质地均一、特异性强。本发明的检测人总脂联素的试剂盒可根据用途进行灵敏度和检测范围调控，不仅适用于血中人脂联素含量的测定，而且高敏BA‑ELISA适宜检测唾液、尿液、乳汁、尿液及关节液以及脂肪细胞培养上清的脂联素水平。

技术领域

本发明属于免疫学和生物技术领域，涉及抗人脂联素的单克隆抗体及其应用，更具体地，涉及利用抗人脂联素的单克隆抗体制备的人总脂联素酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒及其大批量检测样本的临床应用。

背景技术

人脂联素(Adiponectin,又名apM1,Arcp-30,AdipoQ,GBP-28)是由apM1基因编码，由244个氨基酸残基构成的蛋白分子，具有与胶原VIII、胶原X、补体C1q和TNF-α同源的结构域。人脂联素主要在脂肪细胞特异表达和分泌，是血液中含量最丰富的细胞因子，约占总血浆蛋白的0.01％，循环中的脂联素以多聚体形式存在，包括高分子量(high molecularweight，HMW,12-18聚体及更高)的主要形式、中分子的六聚体(hexameric middlemolecular weight，MMW)和少量的低分子三聚体(trimeric low molecular weight，LMW)形式。不同形式的脂联素功能有所不同。

大量实验表明，脂联素具有广阔应用前景。脂联素可通过不同的途径作用于多个器官，在一些重要的生理过程中发挥关键的调控作用，包括糖脂代谢、造血、炎症、补体激活、血栓形成以及抗肿瘤细胞生长等，其分泌失调与许多疾病的发生、发展密切相关。基因扫描将2型糖尿病、代谢综合征和冠心病的易感基因均定位于3q27，正是脂联素基因所在区域，脂联素基因突变引起的低脂联素血症与上述疾病发生密切相关。一些抗糖尿病药物如噻唑烷二酮类更是把增加脂联素的表达作为2型糖尿病改善胰岛素抵抗的治疗靶点。临床研究也显示，对于肥胖患者尤其是伴胰岛素抵抗者，脂联素表达水平显著降低，体重减轻后表达上调，并伴随胰岛素敏感性提升，因此，脂联素可作为反映脂肪组织内分泌功能变化的重要标志物，不仅可以区分具有不同健康风险的肥胖亚型，还可作为减重效果评价的重要指标。对于2型糖尿病患者，血中脂联素浓度显著降低，并且降低的程度与与胰岛素抵抗及糖尿病的进展相平行，可望成为评判2型糖尿病代谢状况的新指标。大量的流行病学证据还显示，脂联素水平降低可以预测2型糖尿病、代谢综合征、冠心病以及某些肿瘤的患病风险。因此检测脂联素水平对于上述疾病的早期预测、治疗监控以及预后判断都具有重要参考价值。除血液以外，新近临床研究还发现唾液、尿液、关节液以及乳汁等样本中的脂联素水平也具有不同的检查价值和病理生理意义，从而进一步拓展了脂联素水平检测的临床意义和发展潜力。

目前，检测脂联素的定量方法主要有采用多克隆抗体的竞争性放射免疫分析方法(RIA)和双抗体夹心分析模式的酶联免疫吸附方法(ELISA)。ELISA方法灵敏度高，特异性强，标记试剂稳定，无RIA方法的放射污染和危害，因此应用广泛。但现有试剂盒大都受限于关键试剂如检测抗体不能自己生产，不仅价格昂贵，且质量和稳定性难以长期保障；有的试剂盒还受限于使用多克隆抗体，多抗供量有限且批间差异大，这样的试剂盒难以适应大批量长时期开展前瞻性临床研究的需要；同时，由于循环中存在不同聚合形式的脂联素，不同方法采用的抗体性质不同，特别是采用多克隆抗体，结合位点不同，与不同聚合形式的结合能力也不同，因此准确测定各种形式的总脂联素的浓度有很大难度；此外，大多试剂盒用途单一，没有完整考察是否适用于包括血清/浆、唾液、关节液、乳汁和细胞培养上清等各类生物样本的大批量检测，也没有详细考察能否检测包括多种分子形式脂联素的总体水平。

发明内容