[发明专利]一种利用实时荧光定量PCR检测H7N9禽流感病毒的引物及方法在审
| 申请号： | 201410639459.6 | 申请日： | 2013-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN104388589A | 公开（公告）日： | 2015-03-04 |
| 发明（设计）人： | 陈奕磊;李文静;王淑一;黎飒;徐建成 | 申请（专利权）人： | 杭州艾迪康医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州金道专利代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310023 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 实时 荧光 定量 pcr 检测 h7n9 禽流感 病毒 引物 方法 | ||
1.一种利用实时荧光定量PCR检测H7N9禽流感病毒的引物，其特征在于，所述引物包括：
(1) 检测H7N9禽流感病毒包膜表面血凝素H7的引物及探针：
H7-F: GGGWTTCACMTACAGYGGAATAAG
H7-R: ACAGGARCCATTTCATCTCYGC
H7-probe: FAM-CAACSAGTGCATGTAGGAGATCAGGWTCTTC-TAMARA；
(2) 检测H7N9禽流感病毒神经氨酸酶N9的引物及探针：
N9-F: TGARTGCAGGTTCTATGCTCTCA
N9-R: TGTATACTGTGGGYGGTGATGA
N9-Probe: HEX-CTCAAACGGAACAATACACGATAGGTCCCA-TAMARA。
2.利用实时荧光定量PCR检测H7N9禽流感病毒的方法，其特征在于，所述包括以下步骤：
(1) 用RNA提取试剂提取呼吸道标本的RNA；
(2) 用逆转录试剂将步骤(1)中得到的RNA进行反转录为cDNA；
(3) 使用引物H7-F、H7-R和N9-F、N9-R及相应探针H7-probe、N9-probe在单管PCR反应体系中对步骤(2)得到的cDNA进行实时荧光定量PCR检测；其中
H7-F: GGGWTTCACMTACAGYGGAATAAG
H7-R: ACAGGARCCATTTCATCTCYGC
H7-probe: FAM-CAACSAGTGCATGTAGGAGATCAGGWTCTTC-TAMARA；
N9-F: TGARTGCAGGTTCTATGCTCTCA
N9-R: TGTATACTGTGGGYGGTGATGA
N9-Probe: HEX-CTCAAACGGAACAATACACGATAGGTCCCA-TAMARA。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，实时荧光定量PCR反应程序：95℃ 10min 预变性；95℃ 15sec，58℃ 35sec，39个循环。
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