[发明专利]一种致病疫霉的LAMP检测引物组合物及其LAMP检测试剂盒和LAMP检测方法

权利要求书

1.一种用于检测致病疫霉菌的LAMP引物组合物，其特征在于：由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和反向环引物LB组成；各引物序列具体如下：

FIP：5′-AATCGCGAAAGCCATGTGAGCCAAACGACCTTTTGTAAGG-3′；

BIP：5′-TTGCTTAGAAAATCCGTACGATCGGACAAATGTTTTTTTAGCGGC-3′；

F3：5′-TGTGAGTGTCTAACATATTTTACG-3′；

B3：5′-GTTAGTTAAATAGGAAATCACGC-3′；

LB：5′-GGCAAGACCATCAAGCTCCAA-3′。

2.权利要求1所述的LAMP引物组合物在检测致病疫霉菌的中的应用。

3.一种检测致病疫霉菌的LAMP试剂盒，其特征在于：包含1mL检测溶液，所述的检测溶液包括：32 mM正向内引物FIP、32 mM 反向内引物BIP、8 mM正向外引物F3、8 mM反向外引物B3、8 mM环引物LB、56 mM dNTPs、0.8 M Tris-HC、0.4 mM KCl、0.4 mM （NH₄）₂SO₄、0.24 mM MgSO₄、4%Triton X-100、Bst DNA polymerase 320单位，180mM羟基萘酚蓝；其中，各引物序列具体如下：

FIP：5′-AATCGCGAAAGCCATGTGAGCCAAACGACCTTTTGTAAGG-3′；

BIP：5′-TTGCTTAGAAAATCCGTACGATCGGACAAATGTTTTTTTAGCGGC-3′；

F3：5′-TGTGAGTGTCTAACATATTTTACG-3′；

B3：5′-GTTAGTTAAATAGGAAATCACGC-3′；

LB：5′-GGCAAGACCATCAAGCTCCAA-3′。

4.权利要求3所述的检测致病疫霉菌的LAMP试剂盒在检测致病疫霉菌的中的应用。

5.一种检测致病疫霉菌的方法，其特征在于：包括提取待检微生物的DNA，以提取的DNA为模板，利用LAMP引物组合物或LAMP试剂盒进行LAMP；扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，在紫外光下检测结果，如果存在特征性阶梯状条带，则证明所检测样品中存在致病疫霉；无特征性阶梯状条带，则所检测样品中无致病疫霉；或观察LAMP反应溶液颜色变化，天蓝色表示检测为阳性，存在致病疫霉；紫色表示检测结果为阴性，不存在致病疫霉菌。

6.根据权利要求5所述的检测致病疫霉菌的方法，其特征在于：提取待检微生物的DNA，取1 μL DNA溶液，加入23μLLAMP试剂盒中的检测溶液和1μL灭菌去离子水进行LAMP，LAMP反应程序为：60℃~65℃，55~85min，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，在紫外光下检测结果。