[发明专利]一种重金属低积累的转基因植物的培育方法

权利要求书

1.一种重金属低积累的转基因植物的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)重组表达载体的构建：

将酵母Ycf1p基因克隆到农杆菌植物双元表达载体上，在限制性内切酶的作用下连接含有Prp1启动子的T载体，得到在Prp1启动子驱动下表达Ycf1p基因的表达载体；

(2)转基因植株的构建：

将所得表达载体转入植物愈伤组织中，用含诱导剂和农杆菌的培养液进行转化，转化后的材料经过共培养-筛选-分化-生根-转基因苗的锻炼和移栽，筛选转基因阳性植株；

其中，所述酵母Ycf1p基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，Prp1启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：

用内切酶SacI与SalI将Ycf1p克隆到中间载体pGEM-5Z上得到pYcf1p-5Z，将pYcf1p-5Z用SalI和SpeI酶切后，回收Ycf1p基因片段，再经T4连接酶连接到经SalI和SpeI酶切后的植物表达载体pCAMBIA1301上，再由BamHI酶切表达载体pCAMBIA1301和含有Prp1启动子的T载体，连接后得到在Prp1启动子驱动下的以潮霉素为筛选标记的表达载体pCAMBIA1301-pRP1-Ycf1p。

3.一种用于培育重金属低积累的转基因植物的载体，其特征在于，所述载体含有酵母Ycf1p基因与根表皮细胞膜特异启动子Prp1；

所述酵母Ycf1p基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，根表皮细胞膜特异启动子Prp1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.含有权利要求3所述载体的工程菌。

5.酵母Ycf1p基因在培育重金属低积累的转基因植物中的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)重组表达载体的构建：

将酵母Ycf1p基因克隆到农杆菌植物双元表达载体上，在限制性内切酶的作用下连接含有Prp1启动子的T载体，得到在Prp1启动子驱动下表达Ycf1p基因的表达载体；

(2)转基因植株的构建：

将所得表达载体转入植物愈伤组织中，用含诱导剂和农杆菌的培养液进行转化，转化后的材料经过共培养-筛选-分化-生根-转基因苗的锻炼和移栽，筛选转基因阳性植株；

所述酵母Ycf1p基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，Prp1启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物为水稻。