[发明专利]一种甲鱼系统性败血症病毒检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种甲鱼系统性败血症病毒检测试纸条，其特征在于：所述的试纸条由条形底板和在条形底板上依次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫；所述的结合垫上包被有抗甲鱼系统性败血症病毒卵黄抗体—胶体金标记物，所述的硝酸纤维素膜上分别设置有由甲鱼系统性败血症病毒抗原包被的检测线和由兔抗鸡卵黄抗体（IgY）包被的质控线。

2.根据权利要求1所述的一种甲鱼系统性败血症病毒检测试纸条，其特征在于所述的抗甲鱼系统性败血症病毒卵黄抗体—胶体金标记物的制备方法如下：将抗甲鱼系统性败血症卵黄抗体与胶体金颗粒直径为15-30nm的胶体金溶液按6-8μg：1mL混合后，在pH5.4的条件下搅拌振荡30-60min，加含10wt%的牛血清白蛋白的PBST缓冲液作为稳定剂，采用低速离心2000-3500rpm，10-20min，再高速离心12000-15000rpm，1-1.5h，取离心管底部暗红色沉淀即得到抗甲鱼系统性败血症球状病毒卵黄抗体—胶体金标记物。

3.一种根据权利要求1所述的甲鱼系统性败血症病毒检测试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）样品垫的制备

 将玻璃纤维纸浸泡于含1wt%牛血清白蛋白、2.5wt%蔗糖、1wt%海藻糖、1wt%吐温-20的0.01M pH7.4的PBS缓冲液中30min后取出，于37℃干燥2-3h即得到样品垫，真空封装，4℃保存备用；

（2）特定包被的结合垫的制备

 将玻璃纤维纸浸泡于含1wt%牛血清白蛋白、2.5wt%蔗糖、1wt%海藻糖，1wt%吐温-20的0.01M pH7.4的PBS缓冲液中30min后，于37℃干燥1-2h后，在每平方厘米的玻璃纤维纸上均匀喷涂10-20μL的抗甲鱼系统性败血症球状病毒卵黄抗体—胶体金标记物，真空冷冻干燥1-2h，即得到结合垫，真空封装，4℃保存备用；

（3）特定包被的硝酸纤维素膜的制备

将甲鱼系统性败血症球状病毒抗原用点膜仪将其包被于硝酸纤维膜上形成检测线；将兔抗鸡卵黄抗体用点膜仪将其包被于硝酸纤维膜上形成质控线，即得到特定包被的硝酸纤维膜，真空冷冻干燥1-1.5h，真空封装，4℃保存备用；其中检测线与质控线相互平行，所述的检测线靠近结合垫端，所述的质控线靠近吸水垫端；

（4）试纸条的制备

将步骤（1）得到的样品垫、步骤（2）得到的特定包被的结合垫、步骤（3）得到的特定包被的硝酸纤维膜和吸水垫按序搭接并粘贴于底板上，裁成4-6mm宽的细条，即得甲鱼系统性败血症病毒检测试纸条，真空封装，4℃保存。

4.根据权利要求3所述的一种甲鱼系统性败血症病毒检测试纸条的制备方法，其特征在于所述的甲鱼系统性败血症球状病毒抗原的制备方法如下：取攻毒感染死亡的小甲鱼，冰上解剖取其内脏，称量，按1：5-1：20加入预先冰浴过的含有1mM 苯甲基磺酰氟（PMSF）的TNE缓冲溶液中匀浆，将匀浆液于4℃，8000g离心20min，沉淀用含1mM PMSF的TNE缓冲液重新悬浮匀浆后再次于4℃，8000g离心20min，合并两次离心所得上清液，将上清液于4℃，6000g离心10min后，取上清液于4℃，38000g离心1.5h，用预冷的TM缓冲液洗去沉淀上层疏松部分，取下层结实白色沉淀部分用含1mM PMSF的预冷的TM缓冲液重悬后于4℃，3500g离心5min后，取上清液再次于4℃，38000g离心1.5h，用TM缓冲液洗去上层疏松部分，下层结实的白色沉淀再次用含1mM PMSF的预冷的TM缓冲液重悬后于4℃，3500g离心5min后，取上清液再次于4℃，38000g离心1.5h，用TM缓冲液洗去上层疏松部分，最终得到的下层结实的白色沉淀即为甲鱼系统性败血症球状病毒抗原。